利用Cre/lox重组系统获得无选择标记的SKTI抗虫转基因烟草

摘要

将置于两个同向lox位点之间的Bar基因表达盒与大豆胰蛋白酶抑制剂SKTI基因表达盒融合后获得相应植物表达载体,转化烟草Wisconsin 38后获得对棉铃虫具有明显抗性的SKTI转基因植株.SKTI转基因植株通过叶盘二次转化法导入Cre基因,对再生植株叶盘进行Basta的抗性检测,检测Bar基因的删除情况.结果表明:绝大多数再生植株对应叶盘在含8 mg/L PPT的筛选培养基上无法再生,Bar基因被删除的效率在38%～100%之间.对Bar基因删除区域进行PCR及克隆测序后发现Bar基因表达盒被精确删除.对Bar基因删除植株开花自交获得的分离后代进行NPTⅡ抗性检测, 5株NPTⅡ敏感植株分子检测显示均只含有SKTI基因而无Cre基因存在,为无选择标记基因的SKTI转基因植株.