大肠杆菌亮氨酰—tRNA合成酶LeuRS67R的纯化及其动力学研究

摘要

本实验室已得到的亮氨酰－ｔＲＮＡ合成酶基因，与文献相比，６７位氨基酸残基由Ｈｉｓ变为Ａｒｇ，此酶被定名为ＬｅｕＲＳ６７Ｒ。我们从该基因与ｐＵＣ１９重组质粒的大肠杆菌ＴＧ１转化子ＴＧ１－９１中得到ＬｅｕＲＳ的高表达，粗抽液中ＬｅｕＲＳ的表达量在转化子中比在宿主菌ＴＧ１中高２０倍以上。用三步柱层析得到电泳一条带的酶，其比活为１７８９单位／毫克。测定其动力学常数，氨酰化活力为Ｌｅｕ、ＡＴＰ的Ｋｍ值分别为