人内皮生长抑制素基因克隆表达及其抑瘤作用

摘要

内皮生长抑制素(endostatin)是最近报道具有抑制肿瘤生长和转移的蛋白质, 为此, 从正常人肝细胞株L02中抽提总RNA, 以RT-PCR法获得了人内皮生长抑制素编码序列. 序列分析表明, 内皮生长抑制素 cDNA开放阅读框架全长555 bp, 此基因(GenBank登录号为AF184060), 共编码184个氨基酸残基, 其中基因序列有5个碱基与文献报道不同, 蛋白质序列中有3个氨基酸残基与文献报道不同, 说明存在人种间差异. 将人内皮生长抑制素 cDNA插入含T7启动子的质粒pET-28a(+)构建表达质粒pET-ENDO, 转化大肠杆菌BL21(DE3), 筛选表达菌株BL-ENDO. 表达菌株1 mmol/L IPTG诱导表达3～5 h后, 产生大量的重组人内皮生长抑制素, 并形成包含体. SDS-PAGE分析表明, 表达的重组蛋白占菌株可溶性蛋白质的25%以上. 经纯化和复性后的内皮生长抑制素在小鼠体内具有明显的抑制肿瘤生长和转移的作用.