人白血病抑制因子基因LIF的克隆、真核表达及活性检测

摘要

白血病抑制因子(LIF)是一种多功能细胞因子,在生物发育及维持正常生理功能中发挥着重要的作用.以成人血细胞的总RNA为模板,利用RT-PCR方法从成人外周血细胞中扩增人白血病抑制因子,而后将其克隆到真核表达载体pcDNA3,在哺乳动物细胞中成功表达.将分泌到细胞培养基中的LIF因子收集,通过LIF信号转导通路下游蛋白质STAT3磷酸化水平的检测、EMSA实验以及荧光酶报告系统检测,发现其具有激活STAT3信号通路的生物学活性.同时,[3H]-TdR参入实验的结果也表明,所表达LIF因子能显著抑制鼠骨髓白血病细胞系Ml的增殖.