牡丹PsZFP1转录因子的特性及表达分析

摘要

含保守锌指结构域的锌指蛋白(ZFP)是一类在调控植物生长发育和逆境响应过程中具有重要作用的转录因子,为了探究转录因子PsZFP1在牡丹休眠解除过程中的功能和作用机制,以牡丹鲁菏红花芽的RNA为模板,通过5′-RACE扩增PsZFP1的全长cDNA序列,利用EditSeq和MEGA 6.0进行氨基酸序列和系统进化树分析,通过烟草叶片瞬时转化分析PsZFP1的亚细胞定位,构建pGBKT7-PsZFP1重组质粒分析PsZFP1蛋白的转录激活活性,并通过酵母单杂鉴定PsZFP1与PsMPT的启动子是否结合;利用qRT-PCR分析PsZFP1基因表达特性,构建重组质粒pET28a+-PsZFP1转化大肠杆菌BL21进行原核表达.结果显示:牡丹PsZFP1基因的全长cDNA序列为1313 bp,其最大开放阅读框为915 bp,编码304个氨基酸;PsZFP1蛋白为亲水性的稳定蛋白,具有CCCH保守结构域,与葡萄VvZFP的亲缘关系最近;PsZFP1蛋白位于细胞核中,具有转录激活活性,具备转录因子特性;PsZFP1可以结合到PsMPT启动子的MYC元件上;qRT-PCR结果显示,低温21 d,PsZFP1的表达量最高,28 d显著下降;重组质粒pET28a+-PsZFP1在BL21中表达,经Ni-NTA柱纯化获得纯度较好的可溶性PsZFP1蛋白.该研究证明PsZFP1为含锌指结构的转录因子,受低温累积诱导,进而上调PsMPT基因表达,促进牡丹花芽能量代谢.