E.coli对藏羊EECs相关凋亡因子表达的影响

摘要

为了探究大肠杆菌(E.coli)对藏羊子宫内膜上皮细胞(EECs)相关凋亡因子表达的影响,采用酶消化法培养EECs,用不同感染复数(MOI)进行E.coli感染试验,通过流式细胞术(Flow CytoMetry,FCM)检测EECs的凋亡率,用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及免疫印迹法(Western Blot)检测Caspase-3、Bcl-2和Bax等凋亡因子RNA和蛋白的表达水平.结果显示,在培养液中加入50 ng/mL表皮生长因子(EGF)能成功培养出EECs,其纯度达到98％以上;E.coli感染试验中,当MOI为1 ∶ 1时,Caspase-3和Bax在EECs的表达量与对照组相比变化不明显,而Bcl-2的表达量显著升高;当MOI为20 ∶ 1时,Bax的表达量显著升高;当MOI为50 ∶ 1时,Caspase-3的表达量显著升高,而Bcl-2的表达量与对照组相比变化不明显.结果表明,酶消化法可成功培养EECs;不同MOI的E.coli感染后,EECs中Caspase-3、Bcl-2和Bax等凋亡因子的表达量较空白组有不同程度的升高,这些凋亡因子可作为识别子宫内膜炎病理变化程度的指标.