F3′5′H基因的克隆、表达载体构建与矮牵牛遗传转化

摘要

类黄酮3′5′羟基化酶(Flavonoid-3',5-'hydroxylase; F3′5′H)是花色素苷代谢途径中的一个关键性酶,能使花色素的合成趋向于形成蓝色的飞燕草色素.从蓝紫色矮牵牛的花瓣中提取总RNA , 利用RT-PCR技术克隆得到了约1.7kb的F3′5′H片段.F3′5′H的 cDNA序列分析结果表明,克隆得到的序列与原序列同源性达到99.34 %,开放读码框为1 521 bp,编码507个氨基酸.将推算的氨基酸序列与NCBI登录的氨基酸序列进行分析比较,发现与文献报道的存在2个氨基酸差异,氨基酸同源率为99.6 %.将此基因构建到含有35S启动子的植物表达载体PBI-F3′5′H上, 并通过农杆菌介导法对粉红色矮牵牛进行了遗传转化,初步鉴定获得了转基因植株.