猪瘟疫苗毒株和流行毒株RT-nPCR检测方法的建立

摘要

为给临床快速鉴别诊断猪瘟提供技术依据,根据GenBank公布的CSFV全基因序列,结合猪瘟序列测定结果,针对NS5B基因区域设计2条通用外扩引物、2条通用内扩引物和1条疫苗毒株特异性内扩引物,建立一种可鉴别猪瘟疫苗毒株和流行毒株的RT-nPCR诊断方法.结果显示,该方法可从HCLV株扩增出2条大小分别为261 bp和157 bp的片段,可从Shimen、SXYL2006、GX54和SD2002等流行毒株扩增出1条261 bp的片段,其他几种常见猪病毒检测均呈阴性;灵敏度试验表明,检测的cDNA质量浓度极限为3.4×10-7 pg/L;116份临床样品中有37份样品检测呈阳性,阳性率为32％;分析部分阳性病料E2基因序列也证实检测结果的准确性.说明:建立的RT-nPCR鉴别诊断方法灵敏度高、特异性好,能直观区分猪瘟疫苗毒株和流行毒株.