阿片类药物长期作用对μ-中国仓鼠卵细胞基因表达的影响及与PC12细胞线粒体膜电势之间的关系

摘要

目的从基因水平人手,筛选DAMGO长期作用后μ-中国仓鼠卵细胞(μ-CHO)差异表达的基因,初步研究阿片类药物与PC12细胞线粒体膜电势之间的关系.方法选用μ受体特异性激动剂DAMGO长期(72 h)作用于μ-CHO细胞,模拟耐受成瘾.利用差异显示PGR、克隆、Northern印迹分析等找出表达水平有改变的基因,测序,并与NIH Blast数据库中序列比对.利用激光共聚焦显微成像、线粒体膜电势测定等方法,观察吗啡短期与长期作用PC12细胞线粒体膜电势的变化.结果其中一条基因在用DAMGO长期刺激μ-CHO细胞后基因水平出现上调,并与大鼠线粒体膜上H+/磷酸基同向转运蛋白编码基因同源性很高.线粒体膜电势测定发现,用10-6～10-4mol/L吗啡短时间(2 h)作用PC12细胞后,细胞内线粒体膜电势部分丧失或完全丧失;长时间(12～60 h)作用后,膜电势出现从部分丧失、完全丧失到逐步恢复的现象,上述现象均能被阿片受体拮抗剂纳洛酮阻断.结论初步提示阿片类药物长期作用含有阿片受体的细胞后,可导致细胞线粒体功能改变,推测阿片类药物可能影响细胞线粒体电子转移、ATP合成过程,此过程可能与阿片类药物长期激活阿片受体导致的成瘾、耐受有关.