应用显微切割-cDNA PCR-SSH法克隆胃癌前病变相关基因

摘要

目的构建胃异型增生组织cDNA消减文库,初步筛选差异表达基因.方法手工显微切割取胃异型增生和正常组织,应用cDNA PCR方法对少量组织全转录组扩增后进行双向抑制性消减杂交(suppression subtractivehvbrdization,SSH),消减后片段与载体连接、克隆、筛选、测序及同源性检索,并用斑点杂交方法验证检测结果.结果正常和异型增生组织互为tester和driver成功构建了2个cDNA消减文库,分别代表在异型增生组织中表达上调和下调基因,测序的26个克隆中15个为已知基因,3个为已知EST,8个为新的EST,GenBank登录号为BQ164614～BQ164616,BQ291516～BQ291520,其中15个片段经证实在胃异型增生阶段有显著表达差异.结论利用本室创建的显微切割-cDNA PCR-SSH法成功构建胃异型增生组织cDNA消减文库,初步筛选部分基因,为寻找胃癌发生相关基因提供重要线索.