小鼠骨髓源半成熟树突状细胞的培养与初步鉴定

摘要

目的 探索培养与鉴定小鼠骨髓来源半成熟树突状细胞 (smDC) 的可行方法.方法 分离、纯化6周龄C57BL/6小鼠骨髓单核细胞,以含10%胎牛血清、2 ng/ml重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和20ng/ml重组小鼠白细胞介素(IL)-4的RPMI-1640培养基培养9 d;再以肿瘤坏死因子-a (TNF-a)(40ng/ml)刺激24 h获得smDC,同时以脂多糖(1 ug/ml)刺激和不加刺激培养24 h获得成熟DC(mDC)和未成熟DC(iDC).扫描电子显微镜、流式细胞术、ELISA检测iDC、mDC和mDC的形态、细胞表面标志及细胞因子的表达.建立体外淋巴细胞反应模型,采用细胞计数试剂盒检测smDC对异基因淋巴细胞的活化作用.结果 smDC的体积介于iDC和mDC之间、多呈类圆形或圆形,胞体直径约为15um,树突长度多在5-10 μm.smDC、iDC与mDC均高表达CD11c,smDC表达CD40、CD80、CD86及MHC.II介于iDC和mDC之间.smDC分泌IL-1β、IL-6和IL-12显著低于mDC(P＜0.01)、分泌IL-12显著低于iDC(P＜0.05),分泌IL-Iβ、IL-6与iDC比较差异无显著性(P＞0.05);smDC、iDC与mDC分泌1L-10差异无显著性(P＞0.05).smDC对异基因淋巴细胞激活作用显著低于mDC和阳性对照(P＜0.01),而与阴性对照和iDC差异无显著性(P＞0.05).结论 smDC可能是一个功能和形态上相对独立的DC亚群,体外利用GM-CSF、IL-4和TNF-a诱导骨髓单核细胞是获得smDC的有效方法.