血管紧张素Ⅱ2型受体抑制小鼠骨髓源树突状细胞的成熟及活化

摘要

目的研究血管紧张素Ⅱ2型受体（AT2R）体外基因转染对小鼠骨髓源树突状细胞（BMDC）成熟活化及部分免疫功能的影响,探讨AT2R参与动脉粥样硬化斑块进展的免疫机制。方法取C57BL/6J小鼠骨髓,经分离、纯化、分化为BMDC,先转染带有绿色荧光蛋白报告基因的AT2R基因重组腺病毒载体（p Ad CMV/AT2R）或空病毒载体（p Ad-GFP）,再用脂多糖刺激为成熟BMDC,分PBS对照组、脂多糖组、p Ad-GFP组、p Ad CMV/AT2R组及p Ad CMV/AT2R＋PD123319组。采用RT-PCR、免疫荧光和激光共聚焦技术方法检测BMDC中AT2R mRNA及蛋白表达;流式细胞术检测BMDC表面标志CD86和MHCⅡ的表达率;液体闪烁计数检测BMDC刺激同源T淋巴细胞增殖的能力;ELISA法检测培养基中白细胞介素12（IL-12）和γ干扰素（IFNγ）的水平。结果 p Ad CMV/AT2R转染BMDC后48~72 h有AT2R mRNA表达,在激光共聚焦显微镜下胞浆及胞核有绿色荧光表达;同时在胞浆有红色荧光AT2R表达。与PBS对照组比较,p Ad CMV/AT2R组和p Ad CMV/AT2R＋PD123319组CD86和MHCⅡ的表达、同源T淋巴细胞增殖和细胞因子分泌量都显著升高（P〈0.01）,但p Ad CMV/AT2R组与脂多糖组比较显著降低（P〈0.01或P〈0.05）,而p Ad CMV/AT2R＋PD123319组与脂多糖组比较差异无显著性（P〉0.05）。结论体外基因转染BMDC能表达AT2R,AT2R能抑制BMDC成熟诱导的局部免疫炎性反应,且AT2R拮抗剂能阻断此效应,推测AT2R可能介导稳定斑块及抑制动脉粥样斑块进展的作用。