电刺激对缺氧缺血性脑损伤幼鼠大脑皮层气体信号分子的调节作用

摘要

目的：针刺疗法是我国中医疗法的精髓所在,临床实践证实针刺对治疗脑性瘫痪具有明显疗效。新型气体信号分子硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)在生物体内源性产生,并且在各种生理与病理状态下发挥着广泛的生物学效应。为探讨针灸治疗神经系统疾病的分子生物学水平的机制,我们以围产期缺氧缺血性脑损伤大鼠作为脑性瘫痪动物模型,研究电针灸干预后的鼠大脑皮层硫化氢含量及相关酶的表达,找寻针刺治疗神经系统疾病的气体生物学机制.
　　 方法：日龄7天的Sprague-Dawley新生大鼠48只,随机分为6组:(1)假手术对照组(n=8)；(2)假手术+针刺组(n=8)；(3)缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic braindamage,HIBD)对照组(n=8)；(4)HIBD+针刺组(n=8)；(5)HIBD+羟胺(hydroxylamine,HA)对照组(n=8)；(6)HIBD+HA+针刺组(n=8)。HIBD模型的建立参考Rice的方法建立HIBD大鼠模型:7日龄幼鼠结扎左侧颈总动脉及8％低氧环境2小时.造模次日进行干预,针刺组取穴百会(颅骨前后径与两耳连线之间的交点)、大椎(末节颈椎棘突的正下方),电针频率2/100Hz,强度3mA,30分钟/次/日,共14天；对照组仅固定四肢,不予针刺。HA组于针刺前10分钟腹腔注射药物。分别在针刺疗程的d1,d7,d14对针刺组幼鼠进行皮层脑血流量监测。疗程结束,对大鼠的运动功能进行评价后将大鼠处死、取材。应用敏感硫电极法测定大脑皮层硫化氢含量；应用蛋白质免疫印迹技术(western blot)定量分析大脑皮层组织胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS)；应用免疫组织化学法定位和半定量检测CBS表达；并对脑片进行Nissl染色和HE染色。
　　 结果：针刺可促进HIBD及假手术组大鼠针刺局部皮层脑血流增高,针刺HA干预的HIBD大鼠则脑血流量降低；缺氧缺血性脑损伤大鼠脑皮层硫化氢生成增多,针刺则可下调脑组织的硫化氢水平；大鼠运动功能评价以及病理形态学结果为假手术十针刺组及假手术对照组均正常,病变程度依次HIBD+HA+针刺组,HIBD+针刺组,HIBD+HA对照组加重,HIBD对照组病变最为严重；蛋白质免疫印迹法定量及免疫组织化学法半定量检测CBS含量,以假手术对照组最高,针刺组大鼠脑皮层CBS表达较相应对照组明显降低。
　　 结论：针刺可通过下调大脑皮层CBS水平进而降低局部脑组织H2S生成,发挥促进HIBD大鼠神经细胞活性的恢复和运动功能好转的作用。