心之病络孙络绌急的中医微观病理特征研究

摘要

目的：建立心之病络孙络绌急的大鼠模型,并通过研究不同观察时间点内大鼠整体、器官、组织、细胞以及分子水平的病理变化,以阐明“孙络-微血管”病变之孙络绌急的病理演变规律,为脉络病变的临床微观辨证用药提供理论依据。
　　方法：(1)选取雄性SD大鼠30只,随机分为空白组,造模5 min组、造模10 min组、造模20 min组以及造模30 min组,每组6只。通过股静脉注射pit的方法建立心之病络孙络绌急的病理模型。采用激光多普勒技术检测造模前后心肌表面血流量变化,随后取心肌组织行分别Naga-Olsen染色、电镜观察各组大鼠心肌组织病理变化,并检测各组心肌组织claudin-5、occludin蛋白表达。另取雄性SD大鼠6只,检测造模前后心肌微血管通透性变化。(2)选取雄性SD大鼠30只,随机分为空白组,造模5 min组、造模10 min组、造模20 min组以及造模30 min组,每组6只。造模后检测血浆ET-1、NO、AngⅡ、TXB2以及6-Keto-PGF1α浓度,并检测各组心肌组织iNOS、eNOS、ET-1mRNA表达。(3)选取雄性SD大鼠30只,随机分为空白组,造模5 min组、造模10 min组、造模20 min组以及造模30 min组每组6只,造模后采用TUNEL方法检测各组大鼠心肌细胞凋亡指数,并检测各组微血管新生、凋亡相关蛋白表达。
　　结果：
　　1、与空白组比较,模型组大鼠心脏表面血流量在各时间点均有不同程度的减少(P<0.05或 P<0.01),并且随着时间的推移,血流量呈现出逐渐恢复的趋势。Nagar-Olsen染色显示,造模后10 min开始心肌组织可见大片红染的阳性反应区。缺血表现尤以模型10 min组和模型20 min组最为明显。电镜观察显示各模型组微血管内皮细胞间紧密连接清晰致密,微血管内皮细胞核不规则,染色质不均匀、边集,呈现明显凋亡现象。模型各组吞饮小泡数量明显增加。造模后10 min开始微血管通透性开始增加并持续至观察时间结束。
　　2、与空白组比较,各模型组血浆ET-1水平均显著升高(P<0.01),且于5 min时达到高峰。血浆TXB2在造模5 min组显著升高(P<0.01),而在30 min组时其水平明显下降(P<0.05)。血浆6-keto-PGF1α水平在造模10 min后开始显著下降(P<0.05或P<0.01),并在30 min时达到低峰(P<0.01)。TXB2/6-keto-PGF1α在造模后5 min至20 min显著增高(P<0.01或P<0.05),并于5 min时达到高峰,而在30 min时恢复至正常水平。AngⅡ水平在造模后5 min内并无显著变化,而在造模后10 min开始其水平显著升高(P<0.05),并呈递增趋势,于30 min时达到高峰(P<0.01)。各模型下血清NO浓度表现为不同程度的升高。基因表达方面,iNOS mRNA表达在造模后5min组、10min组显著上调(P<0.01),而在造模后30min组时其表达显著下调(P<0.01),而eNOSmRNA在各时间点表达均明显下降(P<0.05),ET-1 mRNA在各组均有不同程度的升高。
　　3、空白组大鼠未见明显阳性凋亡细胞,各模型组凋亡细胞数量明显增加(P<0.05),并且随缺血时间延长,凋亡细胞数量逐渐升高。与空白组比较,Bax蛋白表达在造模后20 min开始明显升高(p<0.01)。各模型组bcl-2蛋白表达无明显变化。p53方面,与空白组比较,模型组大鼠在前20 min内无明显变化,而在30 min时显著增强(p<0.05)。与空白组比较,各模型组CD34、VEGF、PDGF、Ang2蛋白表达均未有明显变化(p>0.05)。
　　结论：
　　1.孙络绌急病变急性期,心肌表面血流量即可明显减少。
　　2.孙络绌急病变急性期,心肌表面微血管通透性显著升高,微血管内皮细胞紧密连接结构完整,紧密连接蛋白表达未见明显升高,吞饮小泡数量显著增加,提示孙络绌急急性期微血管内皮细胞可能通过吞饮小泡的大量释放来使其通透性发生改变。
　　3.孙络绌急病变急性期微血管内皮细胞正常调节分泌功能紊乱,微血管舒缩因子TXA2、PGI2、ET-1、NO异常分泌、基因异常表达,动态平衡遭到破坏。孙络绌急发生后 RAS系统可被激活并在进一步心肌损伤过程中逐渐发挥重要作用。多种舒缩因子动态变化也提示多种复杂机制相互作用共同参与诱导着孙络绌急发生发展过程。
　　4.孙络绌急病理条件下,机体可能通过调节局部细胞凋亡相关因子的表达启动凋亡程序,促进细胞凋亡。
　　5.孙络绌急急性期观察时间内未发现明显微血管新生现象。

目录

封面

声明

目录

英文缩略词表

中文摘要

英文摘要

前言

第一部分 心之病络孙络绌急模型大鼠心肌表面血流量及通透性变化研究

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

第二部分 心之病络孙络绌急模型大鼠微血管舒缩因子动态变化研究

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

第三部分 心之病络孙络绌急模型大鼠心肌微血管新生与凋亡相关蛋白变化研究

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

总结论

参考文献

文献综述

参考文献

攻读硕士学位期间发表论文情况

致谢