乌司他丁联合肿瘤特异性CTL治疗癌性恶病质小鼠的实验研究

摘要

研究背景:恶病质是晚期肿瘤患者的重要表现和主要死亡原因,其本质是全身过度的非特异性炎症反应。具体表现为以巨噬细胞和中性粒细胞为主体的炎性细胞释放大量炎症因子,引发过度炎症反应,导致机体代谢紊乱、免疫崩溃及多器官衰竭。目前,一般的抗炎药物并不能有效改善癌性恶病质的炎症反应。乌司他丁是一种蛋白酶抑制剂,具有调控炎性介质释放、改善循环障碍和增强免疫功能等作用,已广泛应用于SIRS、MODS、胰腺炎、休克、烧伤、围手术期等。但应用于癌性恶病质的抗炎治疗尚未见报道。在机体过度炎症反应的同时,以淋巴细胞为主的抗肿瘤免疫细胞受到抑制,甚至耗竭,削弱了对炎性细胞及其因子的调控和抑制,并且导致肿瘤进一步扩散,形成恶性循环。如何有效地抑制或平衡全身过度炎症反应,调动机体抗肿瘤的免疫功能,是研究晚期肿瘤治疗策略的突破口。近年来过继细胞免疫疗法受到广泛关注,是继手术、放疗、化疗之后肿瘤综合治疗的第四种疗法。过继转移肿瘤特异性 T淋巴细胞,具有靶向性抑制肿瘤的生长、转移和复发,促进机体抗肿瘤免疫功能重建,特别是淋巴细胞的输入可以有效平衡炎症反应,提高生活质量,延长生存期。故本研究拟联合抗炎药物乌司他丁和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)治疗癌性恶病质小鼠,在抗肿瘤的同时降低系统性炎症反应,探索治疗癌性恶病质的新策略。
　　研究目的:制定乌司他丁联合CTL的抗肿瘤治疗新方案,观察其在小鼠癌性恶病质模型的治疗效果,探讨其在抑制恶病质炎症反应及增强抗肿瘤免疫功能等方面的作用机制。
　　研究方法:1)BALB/c雄性小鼠腋窝皮下注射C26细胞构建小鼠CC模型。2)癌性恶病质小鼠分组腹腔内注射促红细胞生成素、塞来昔布、乌司他丁,评价3种药物的抗炎效果及其对免疫功能的影响。3)以正常小鼠脾脏和骨髓分别提取培养T淋巴细胞和树突状细胞(DC),诱导培养肿瘤特异性CTL。4)癌性恶病质小鼠腹腔内同时注射乌司他丁和CTL,评价其抗肿瘤和抗炎效果。
　　研究结果:1)成功构建癌性恶病质模型,造模第9天进入轻度恶病质状态,第13天进入中度恶病质状态,第18天进入重度恶病质状态。2)乌司他丁可以降低癌性恶病质小鼠IL-6、TNF-α及CRP水平(P<0.05),作用与塞来昔布相仿,优于促红细胞生成素;乌司他丁可以明显促进癌性恶病质小鼠外周血T细胞、NK细胞和脾脏NK细胞的增殖(P<0.05),作用优于其他各组。3)联合治疗组可以改善癌性恶病质小鼠的体重下降(P<0.05)和降低肿瘤的生长速度(P<0.01);降低白蛋白、脂肪、糖的消耗并增加腓肠肌、附睾脂肪的重量(P<0.05);降低外周血IL-6、TNF-α及CRP水平(P<0.05),并促进外周血T细胞和NK细胞的增殖(P<0.05)及脾脏NK细胞的增殖(P<0.01)。
　　研究结论:1)本研究制备的小鼠模型临床表现和实验室检查符合癌性恶病质的特点,致瘤率高、稳定性好,真实地模拟了其病理过程,且制备方法简便、可操作性强,对癌性恶病质的基础与临床研究有较好的应用价值。2)乌司他丁可以改善癌性恶病质小鼠的一般状态及营养状况,有效减轻炎症反应并增强免疫功能,减缓疾病的进展。3)乌司他丁联合CTL可以有效降低癌性恶病质小鼠炎症因子的释放,增强CTL抗肿瘤效果,提高免疫功能,改善营养状况,减缓恶病质的进展,作用优于单独使用免疫治疗。

目录

封面

声明

目录

中文摘要

英文摘要

中英文对照表

前言

第一章 小鼠癌性恶病质模型的构建

第一节 试剂材料

第二节 实验方法

第三节 实验结果

第四节 讨论

第二章 癌性恶病质小鼠抗炎治疗的体内药物筛选

第一节 试剂材料

第二节 实验方法

第三节 实验结果

第四节 讨论

第三章 乌司他丁联合肿瘤特异性CTL治疗癌性恶病质小鼠

第一节 试剂材料

第二节 实验方法

第三节 实验结果

第四节 讨论

第四章 结论

参考文献

文献综述

参考文献

攻读学位期间发表文章情况

致谢