外周血细胞长链非编码RNAs(lncRNAs)对脓毒症预警诊断价值的初步研究

摘要

目的：脓毒症是危重症患者的主要死亡原因之一。目前脓毒症主要依赖临床诊断,但其早期临床表现无特异性,且又缺乏及时可靠的预警诊断指标,这是造成脓毒症患者高病死率的重要原因之一。长链非编码 RNAs是一类转录本长度超过200nt,不编码蛋白质的开放性阅读框。本研究旨在评价长链非编码RNAs作为脓毒症预警诊断指标的可行性。
　　方法：选取3例脓毒症患者和3例健康志愿者为研究对象,应用lncRNA表达谱芯片对差异表达的lncRNAs进行初步筛选并应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)验证,随后于22例脓毒症患者(其中16例存活,6例死亡)和22例健康志愿者中扩大样本量 qRT-PCR验证芯片结果,同时分析差异表达的lncRNAs对脓毒症的预警诊断价值。
　　结果：1.应用lncRNAs表达谱芯片筛选出差异在20倍以上的lncRNAs28条,其中脓毒症患者相比健康志愿者表达水平上调的14条,下调的14条。2. qRT-PCR验证其中5条lncRNAs: lncRNA ENST00000452391.1、uc001vji.1、uc021zxw.1、ENST00000504301.1和 TCONS_00028547,它们在脓毒症患者与健康志愿者之间的表达水平均与芯片筛选结果相一致。3.于22例脓毒症患者和22例健康志愿者中扩大样本量 qRT-PCR验证这5条 lncRNAs:脓毒症组 lncRNA ENST00000452391.1表达水平明显高于对照组, lncRNA uc001vji.1和 lncRNA uc021zxw.1表达水平明显低于对照组,p值均<0.01,结果均与芯片结果一致;脓毒症组与对照组lncRNA ENST00000504301.1、lncRNA TCONS_00028547表达水平差异无统计学意义,p值分别为0.213和0.064。4.根据预后将脓毒症患者分为生存组(16例)和死亡组(6例),生存组lncRNA ENST00000504301.1、lncRNA TCONS_00028547表达水平及白细胞计数显著高于死亡组, lncRNA ENST00000452391.1表达水平、SOFA评分、APACHEⅡ评分显著低于死亡组,p值均<0.05;两组间lncRNA uc001vji.1、lncRNA uc021zxw.1、IL-6、CRP、PCT等指标差异无统计学意义,p值分别为0.914、0.203、0.559、0.914、0.449。5. lncRNA uc021zxw.1与HLA-DRB1基因有重叠,lncRNA TCONS_00028547与PI3基因毗邻, HLA-DRB1、PI3与免疫应答密切相关,而且Pearson相关性分析得出HLA-DRB1与lncRNA uc021zxw.1表达值的相关系数为0.9974,属强相关,推测lncRNAs可能通过调控它们的表达参与脓毒症的发生发展过程。
　　结论:1. lncRNA ENST00000452391.1、lncRNA uc001vji.1和 lncRNA uc021zxw.1在脓毒症和健康志愿者中存在表达差异,有可能用于脓毒症的预警诊断。2. lncRNA ENST00000504301.1、lncRNA ENST00000452391.1和 lncRNA TCONS_00028547在脓毒症患者生存组与死亡组中存在表达差异,可能与脓毒症的预后相关。3. lncRNA uc021zxw.1和lncRNA TCONS_00028547可能分别通过调控HLA-DRB1、PI3基因表达参与了脓毒症的发生发展过程。

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缩略词表

前言

第一部分应用lncRNAs表达谱芯片对脓毒症患者与健康人差异表达的lncRNAs初步筛选

第一节 材料与方法

一、研究对象

二、主要试剂与仪器

三、实验步骤

第二节 实验结果

第三节 讨 论

第二部分实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应验证芯片结果

第一节 材料与方法

一、研究对象

二、主要试剂与仪器

三、实验步骤

第二节 实验结果

第三节 讨 论

第三部分lncRNAs在脓毒症预警诊断中价值的初步研究

第一节 材料与方法

一、研究对象

二、主要试剂与仪器

三、实验步骤

第二节 实验结果

第三节 讨 论

结论

参考文献

文献综述

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