KLF6基因表达下调在肾透明细胞癌远处转移中的作用及其机制研究

摘要

目的:肾细胞癌是泌尿系统最常见的恶性疾病之一，在所有的泌尿系统肿瘤中，肾癌的发生率和死亡率为第二位。肾透明细胞癌是肾细胞癌中最常见的病理类型，对放化疗不敏感，临床上缺乏有效的预测指标及治疗靶点。前期芯片结果提示在转移性肾透明细胞癌原发灶肿瘤组织中转录因子KLF6的表达下调，E2F1的表达升高。因此本课题探讨了KLF6和E2F1在肾透明细胞癌远处转移中的作用和可能的作用机制。
　　方法:①将配对的4例原发转移性肾透明细胞癌以及5例原发未转移肾透明细胞癌组织样本，使用Affymetrix Human Genome U133 Plus2.0 Array进行mRNA微阵列芯片筛选。t检验筛选分组间具有明显表达差异的基因(P＜0.05)。随后利用实时定量PCR和western blot在扩大的样本量中检测差异基因KLF6 mRNA表达水平和蛋白表达水平，验证芯片结果。②肾癌细胞系（769-P，786-O，Caki-2，以及OS-RC-2）的体外实验研究KLF6对细胞增殖、侵袭、迁移等生物学功能的影响。③基于生物信息学Gene Set Enrichment Analysis(GESA)分析可能的促进肾透明细胞癌发生远处转移的关键基因。对关键因子E2F1启动子区域的高级分析及预测，计算编码基因集合与转录因子/染色质调控复合物的靶基因集合的交集，利用计算该交集的富集程度，得到与E2F1显著相关的转录因子，寻找KLF6与E2F1表达调控相关的作用机制。④建立裸鼠肾脏原位和转移肿瘤模型，利用分子显像系统活体监测KLF6与E2F1对肿瘤生长及转移的影响。⑤组织标本中检测KLF6以及E2F1与临床资料及随访结果的相关性分析。
　　结果:①在扩大的样本量（转移性VS非转移性肾透明细胞癌）组织中检测KLF6 mRNA和蛋白的表达。结果表明KLF6 mRNA和蛋白水平在原发性转移组中下调，证实了芯片检测的结果。②MTS以及细胞迁移和侵袭实验结果表明KLF6能抑制肿瘤细胞的增殖，降低肿瘤细胞的迁移和侵袭能力。③在肾透明细胞癌中，KLF6能够通过结合E2F1启动子区域抑制E2F1的转录，继而下调E2F1的表达。④在肾癌细胞系中KLF6表达下调能促进E2F1基因的表达上调，从而诱导细胞发生EMT，促进肿瘤细胞侵袭迁移。⑤裸鼠原位肾肿瘤和肺转移实验结果表明，原位种植稳定敲低KLF6的786-O细胞株与对照组相比，肿瘤体积明显增大，肺部转移灶的形成显著增多，而敲低E2F1表达，能够逆转以上促进肿瘤进展的过程。⑥对114例肾透明细胞癌患者临床数据进行多元回归分析，发现KLF6的mRNA表达下调和肾肿瘤T分期是肾透明细胞癌发生远处转移的独立危险因素。随访和生存分析结果表明肾癌组织KLF6低表达和E2F1高表达的患者预后不良。
　　结论:①转录因子KLF6表达下调可能与肾透明细胞癌的进展和转移有关。②KLF6在肾透明细胞癌细胞系中抑制增殖，降低细胞侵袭力。③肾透明细胞癌中KLF6能负向调控E2F1并能通过影响EMT相关下游靶基因来促进肾透明细胞癌的恶性进展和远处转移。④KLF6低表达是肾透明细胞癌患者发生远处转移的独立危险因素。而KLF6低表达和E2F1高表达预示着患者预后较差。因此，KLF6有可能成为肾透明细胞癌预后评估和新的治疗靶点，为临床治疗寻找新的途径和线索。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 转录因子KLF6在转移性肾透明细胞癌组织中的表达

1．材料与方法

2．结果

3．小结

第二部分 KLF6基因表达下调对肾透明细胞癌细胞系增殖能力和侵袭能力的影响

1．材料与方法

2．结果

3．小结

第三部分 基于生物信息学途经研究转录因子E2F1在转移性肾透明细胞癌组织中的表达及其机制研究

1．材料与方法

2．结果

3．小结

第四部分 KLF6通过调控E2F1的表达参与肾透明细胞癌EMT的发生

1．材料与方法

2．结果

3．小结

第五部分 KLF6与E2F1对裸鼠原位肾癌种植模型和肺转移的影响

1．材料与方法

2 结果

2．小结

第六部分 KLF6与E2F1的表达对肾透明细胞癌预后的影响

1．材料与方法

2 结果

3 小结

讨论与结论

参考文献

综述：机器人肾部分切除术的应用现状和研究进展

英文略缩词表

攻读学位期间研究成果

致谢