微粒皮移植治疗皮肤色素脱失相关问题的实验研究

摘要

目的:
　　1.通过观察不同剪切时间下微粒皮形态和活力的比较，来确定微粒皮移植中最佳的剪皮时间;
　　2.在裸鼠背部表皮内注射一定浓度培养好的人表皮黑色素细胞，观察其局部是否出现色素区，该区域能否随时间扩大，最大扩展范围等，为临床应用积累理论依据。
　　方法:
　　第一部分:不同剪切时间下微粒皮形态和活力的比较
　　随机选取患者8名。每名选取大腿外侧刃厚皮（电动刀刻度定为厚0.25mm）5cm2，切割成五等分，每份1cm2，其中4份剪成微粒，剪切时间分别为5、10、15、20分钟，另一份不剪，作为正常对照组。然后对各组进行组织琥珀酸脱氢酶(SDH)和氧耗量的测定。测定完毕后，送部分组织作常规HE染色。
　　第二部分:人表皮黑色素细胞裸鼠皮内注射后皮肤组织学的初步观察
　　细胞实验:购买美国ScienCell公司的人表皮黑色素细胞-深色（HEM-d）原代细胞，复苏并培养、传代、冻存等，在倒置相差显微镜观察HEM-d原代及各代细胞的形态并拍照;首批细胞主要用来观察和积累培养经验。第二批HEM-d，原代细胞复苏并传为一代后，一部分细胞用来做动物实验，另一部分细胞继续传代培养。
　　动物实验:雄性SPF级裸鼠（BALB/c-nu）5只，背部表皮下注射培养良好的HEM-d一代细胞，此注射的为含有培养基的细胞，浓度为4×104个/ml;设置对照试验，皮下注射HEM-d的完全培养基。注射后连续观察裸鼠表皮是否出现色素变化，色素区域是否随时间扩大;并分别于第1d、15d、30d、60d取注射细胞部位的全层皮肤，于4％多聚甲醛溶液中固定保存，做HE染色，在显微镜下观察黑色素细胞或黑色素颗粒是否存在及其存在的位置。
　　结果:
　　1.微粒皮剪切有个最佳时间点，时间过长微粒皮的活力逐渐减低。
　　2.人表皮黑色素细胞-深色（HEM-d）注射裸鼠表皮内能够使其皮肤显黑色，HE染色显示裸鼠表皮内存在黑色素细胞，且注射后的细胞已成活，黑色着色区域实验期间内逐渐扩大。
　　结论:
　　1.微粒皮剪切有一个最合适的时间，剪切时间过长，颗粒大小变化不大，但其活力逐渐降低。
　　2.体外培养的人表皮黑色素细胞注射裸鼠表皮内能够使其皮肤显黑色，并随着时间逐渐变大;HE染色可见种植部位黑色素细胞形态正常。这为临床实践提供了理论依据。

目录

声明

英文缩略词表

摘要

第一部分：不同剪切时间下微粒皮形态和活力的比较

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分：人表皮黑色素细胞裸鼠皮内注射后组织学的初步观察

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

全文总结

文献综述 白癜风的相关研究及进展

攻读学位期间发表文章情况

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