布洛芬作用于酸敏感离子通道发挥脑保护作用的机制研究

摘要

目的:脑卒中是一种急性的脑血管疾病。因其具有高发病率、高复发率、高致残率和死亡率，严重影响着患者的生活质量。其中，缺血性脑卒中较出血性脑卒中具有更高的发病率，占脑卒中总数的60％-70％。缺血性脑卒中的发病机制和病理生理过程极其复杂，因此给临床治疗带来了极大的困难。酸中毒是组织缺血缺氧后的一个重要病理生理变化。近年来研究发现，胞外pH值下降能激活一种特殊的配体门控通道，酸敏感离子通道(Acid-sensing ion channels—ASICs)，这极大地改变了人们对缺血性脑损伤机制的认识[1]。目前，已经克隆出六种ASIC亚基(1a、1b、2a、2b、3和4)[2]，其中，H+敏感性高且对Ca2+通透ASIC1a同聚体通道和ASIC1a/2b通道在参与脑缺血和再灌注损伤过程中发挥着重要作用[3-8]。布洛芬是临床上常用的抗炎镇痛药，早在上世纪九十年代就有文章报道了其脑保护作用[9，10]。但是，对于其神经保护作用的机制目前还没有统一的定论。自从ASICs被发现以来，已有多篇文献[11-13]报道了布洛芬对ASICs的作用。本研究旨在①观察大脑中动脉阻塞(MCAO)后大鼠皮层缺血半暗带ASIC1a和ASIC2a表达变化情况并探讨其意义;②观察布洛芬的神经保护作用及其对ASIC1a和ASIC2a表达和上膜的影响，探索其以ASIC2a为靶点的神经保护作用的机制。
　　方法:①20只SD大鼠随机分为假手术组(sham)10只和MCAO模型组(MCAO)10只，于术后24h取脑，提取脑组织蛋白和分离膜蛋白，用Western blot检测ASIC1a和ASIC2a的总蛋白和膜蛋白情况;②48只SD大鼠随机分为假手术+溶媒组(S+Rn=12)、假手术+布洛芬组(S+B n=12)、MCAO模型+溶媒组(C+R n=12)、MCAO模型+布洛芬组(C+B n=12)，于术后24h通过神经行为学评分、TTC染色等方法观察布洛芬的脑保护作用和用Western blot观察布洛芬对皮层缺血半暗带ASIC1a和ASIC2a蛋白含量的影响。
　　结果:①脑缺血再灌注24h后，与假手术组相比，MCAO模型组皮层缺血半暗带的ASIC1a的表达没有明显变化(P=0.7004)，其膜蛋白含量增加（P＜0.001），ASIC2a的表达明显上调（P＜0.001）;②布洛芬能提高MCAO模型大鼠的神经行为学评分(P＜0.05)，减少脑梗死容积（P＜0.01），并且能降低皮层缺血半暗带ASIC1a膜蛋白的含量(P＜0.05)和下调ASIC2a的表达（P＜0.01）。
　　结论:布洛芬能够明显改善大鼠脑缺血再灌注损伤后的神经行为学障碍，缩小脑梗死的范围，具有神经保护作用;布洛芬可能通过下调皮层缺血半暗带ASIC2a的表达，减少ASIC1a的膜上分布，发挥神经保护作用。

目录

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英文缩略语表

摘要

前言

第一章 皮层缺血半暗带ASIC1a和ASIC2a的变化及其意义

1．1 材料

1．2 方法

1．3 结果

1．4 讨论

第二章 布洛芬作用于ASICs发挥脑保护作用

2．1 材料

2．2 方法

2．3 结果

2．4 讨论

结论

参考文献

文献综述 酸敏感离子通道在缺血性脑卒中作用的研究进展

附录

攻读硕士学位期间发表文章

致谢