LEP基因启动子区在不同组织中的甲基化状态及代谢手术对其甲基化的影响

摘要

目的:肥胖及其合并症严重威胁人类健康，而我国已经成为世界第一肥胖大国，阻断肥胖的流行趋势是目前临床研究的热点。代谢手术已经被公认为治疗肥胖及其相关合并症最为长期有效的治疗措施，但是临床上仍有少数病人对代谢手术的治疗反应性不佳，提示在机制和适应证选择方面仍有研究空间。表观遗传学，特别是DNA甲基化在肥胖及相关疾病的发生和发展中有重要意义。本研究选取了在肥胖发生中较为重要的LEP基因，通过研究LEP基因启动子区在不同组织中的DNA甲基化水平及其对LEP基因表达的调控情况，以及代谢手术对人体LEP基因启动子区DNA甲基化的干预情况，明确LEP基因在肥胖及其相关合并症的发生与发展中的作用，并评估代谢手术对这一基因甲基化的影响，以便为肥胖及代谢综合征的相关研究提供新的方向。
　　方法:1、选取2014年10月至2015年10月间接受减重手术治疗的38名成年肥胖病人以及同期12名非肥胖成人，每名病人分别获取其外周血、腹部皮下脂肪组织及内脏脂肪组织（大网膜脂肪）标本;2、甲基化特异性PCR法(MS-PCR)对获得标本中LEP基因启动子区的甲基化情况进行分析，比较个体间及组织间差异;3、实时荧光PCR法(qPCR)对LEP基因转录情况进行测定，并结合血leptin浓度进行分析，研究LEP基因启动子区甲基化对该基因表达以及其产物生成的影响;4、分别对人皮肤成纤维细胞及小鼠脂肪细胞进行去甲基化处理，分别测定两种细胞去甲基化处理前后LEP基因mRNA的含量，研究去甲基化对LEP基因转录的影响;5、对38名接受代谢手术的肥胖患者进行1年的术后随访，收集相关术后临床资料，并对其术后外周血LEP基因启动子甲基化水平进行研究，明确手术对肥胖病人DNA甲基化水平是否存在影响。
　　结果:1、同一个体内外周血淋巴细胞、皮下脂肪组织及内脏脂肪组织中的LEP基因启动子区甲基化水平无显著差异;2、与体重正常者相比，肥胖患者LEP基因启动子区甲基化水平更低(P＜0.001);3、与体重正常者相比，肥胖患者LEP基因mRNA在脂肪组织中水平更高(P＜0.001);4、经去甲基化处理后，人皮肤成纤维细胞及小鼠脂肪细胞中LEP基因转录水平均增加;5、38名肥胖患者代谢手术术后1年，多余体重减少58％，胰岛素抵抗水平明显降低，未发生严重并发症;6、代谢手术术后患者出现LEP基因启动子区甲基化水平上升及血leptin水平降低，与术前相比有统计学差异(P＜0.05)。
　　结论:1.外周血淋巴细胞LEP基因启动子区甲基化水平可以用于衡量脂肪组织中该基因甲基化水平;2.不同个体间特定组织LEP基因启动子区甲基化水平存在差异，肥胖患者该基因有去甲基化倾向;3.特定组织和细胞中LEP基因启动子区去甲基化可促进该基因转录，并可能导致leptin合成增加，这种调控作用具有组织特异性;4、代谢手术可以提高LEP基因启动子区的甲基化水平，并有可能通过降低该基因的表达来缓解肥胖患者中的高leptin血症。

目录

声明

英文略缩词表

摘要

前言

第一部分 LEP基因启动子区在不同组织中的甲基化状态

材料与方法

结果

讨论

小结

第二部分 外周血LEP基因启动子甲基化在代谢手术术后的变化情况

材料与方法

结果

讨论

小结

结论

参考文献

文献综述

致谢