膜片钳技术研究大麻素/食欲素通路干预海马神经元放电机制

摘要

目的：
　　采用膜片钳技术研究大麻素、食欲素受体通路对海马CA1区锥体神经元放电的影响及可能的作用机制。
　　方法：
　　将出生15-20天的Wistar大鼠取脑，急性分离出单个CA1区锥体神经元，用膜片钳技术记录神经元电活动，观察非选择性大麻素受体激动剂Win55212-2、非选择性食欲素受体激动剂Orexin A对神经元静息电位、自发发放频率等影响。在大麻素实验中，根据神经元对Win55212-2的反应分为超极化组和去极化组;在食欲素实验中，根据神经元自身放电频率，将其分为低频组和高频组。采用MTT染色法验证组织切片及神经元活性。
　　结果：
　　第一部分（大麻素实验组）:给予大麻素受体激动剂Win55212-2，与给药前比较，给药期间超极化组神经元动作电位频率减少、膜电位显著降低[0 Hz vs.(4.3±3.2) Hz，p＜0.05;(-57.0±4.6) mV vs.(-54.1±3.8) mV, p＜0.01];与给药期间比较，停止给药后神经元动作电位频率增加、膜电位升高，差异有统计学意义(p＜0.01)。与给药前比较，给药期间去极化组神经元动作电位频率显著减少[0 Hz vs.(6.2±3.6)Hz，p＜0.01]，膜电位显著升高[(-45.0±4.7) mV vs.(-47.3±4.4) mV, p＜0.01];与给药期间比较，停止给药后神经元动作电位频率增加，膜电位降低，差异有统计学意义(p＜0.05)。这些作用在部分神经元可被大麻素受体1拮抗剂AM251削弱;电压依赖性钾离子通道的非选择性阻滞剂四乙胺-TEA(tetraethylammonium，2μmol/L)也可在不同程度上逆转超极化组大麻素受体激动剂抑制神经元电活动的作用。
　　第二部分（食欲素实验组）:给予食欲素受体激动剂Orexin A，在低频组中，Orexin A激活了58％(28/48)神经元，给药期间神经元放电频率明显多于给药前，(5.36±3.64 Hz vs.1.43±0.88 Hz，p＜0.05);而停止给药后与给药期间(3.00±2.85 Hz vs.5.36±3.64 Hz，p=0.052)、停止给药后与给药前(3.00±2.85 Hz vs.1.43±0.88 Hz，p=0.136)的频率相比较，无统计学差异。在高频组中，OrexinA激活了40％(4/10)神经元。给药期间神经元放电频率明显多于给药前，(6.98±2.45 Hz vs.4.93±2.55 Hz，p＜0.05)，停止给药后与给药期间相比频率显著减少(3.80±1.28 Hz vs.6.98±2.45 Hz，p＜0.05)，停止给药后与给药前相比，无统计学差异(3.80±1.28 Hz vs.4.93±2.55 Hz，p=0.215)。在两组中，膜电位在三个阶段变化并无统计学差异。
　　结论：
　　海马CA1区锥体神经元上可能存在大麻素受体1及食欲素受体1;激活食欲素受体可兴奋神经元;而激活大麻素受体可能通过不同的机制抑制CA1区锥体神经元放电，且部分有电压依赖性钾通道参与。

目录

声明

中英文缩略词对照表

摘要

前言

第一部分 大麻素受体通路干预海马神经元放电机制研究

1 资料和方法

2 结果

3 讨论

第二部分 食欲素受体通路干预海马神经元放电机制研究

1 资料和方法

2 结果

3 讨论

小结

参考文献

综述 食欲素与神经系统疾病研究进展

攻读学位期间发表文章情况

致谢