雄原核注射sMTPGH基因小鼠胚胎的体外培养

摘要

转基因动物的建立是一项复杂而艰苦的工作,提高转基因动物的生产效率一直是多年来转基因研究的重点之一.将转基因胚胎在体外培养至可供移植的桑椹或囊胚阶段,并在移植入受体之前对其进行检测无疑可以极大地提高转基因动物的生产效率,对转基因动物建立具有重要意义.鉴于此,实验采用显微注射法在生产小鼠转基因胚胎,并采用体外培养体系将其培养至囊胚,然后对囊胚期胚胎外源基因整合情况进行了研究,以期为进一步探索转基因胚胎植入受体前的体外培养和在大动物进行转基因的检测提供依据.

目录

1.文献综述

1.1外源基因导入技术

1.1.1显微注射法

1.1.2病毒介导的基因转移

1.1.3精子介导法

1.1.4胚胎干细胞法

1.2生产转基因家畜的技术路线

1.2.1经典的技术路线

1.2.2整合胚胎移植技术路线

1.2.3核移植(克隆)的技术路线

1.2.4整合卵技术路线

1.3转基因的整合与表达

1.3.1转基因的整合

1.3.2 MAR与转基因整合表达

1.3.3内含子对表达的影响

1.3.4外源基因的错误剪接影响转基因的表达

1.3.5转基因表达的“援救”

1.3.6酵母人工染色体DNA

1.3.7乳蛋白基因转录调控的研究

1.4转基因动物的应用

1.4.1基础理论的研究(基因表达与调控研究)

1.4.2人类遗传病的转基因动物模型建立

1.4.3动物“生物反应器”

1.4.4用转基因动物生产人类器官替代品

2.前 言

3.材料与方法

3.1材料

3.1.1 DNA操作所用材料和仪器

3.1.2动物和胚胎操作所用材料和仪器

3.2方法

3.2.1 DNA操作技术

3.2.2转基因实验方法

4.结果与讨论

4.1结果

4.1.1重组质粒的滞后现象

4.1.2重组质粒的酶切鉴定

4.1.3原核时期的把握

4.1.4外源基因导入受精卵原核

4.1.5胚胎体外培养发育情况

4.1.6单个胚胎中外源基因的PCR检测

4.2讨论

4.2.1显微注射导入外源基因对原核胚的影响

4.2.2原核胚体外发育培养系统

4.2.3 PCR对早期胚胎中外源基因的检测

5.结论

致 谢

参考文献