一种新的球孢白僵菌内切几丁质酶的纯化和抗血清的制备

摘要

为进一步研究昆虫病原真菌的致病分子机理,及利用基因工程技术改良杀虫菌株奠定基础,该论文开展了球孢白僵菌几丁质酶的纯化工作.另一方面,基于抗原抗体的特异性反应,应用免疫技术来研究分析蛋白质的结构、功能、同源性、进化及其基因表达等,已成为一种广为应用的研究手段.为此,该论文还进行了几丁质酶抗血清制备等研究.现将主要研究内容和结果总结如下:1.产几丁质酶菌株的比较;2.Bbl-1菌株几丁质酶活性的诱导曲线;3.Bbl-1几丁质酶的纯化.

目录

本文受下列基金的资助

一、文献综述

1.1产生几丁质酶的微生物种类

1.2微生物几丁质酶的酶学性质

1.3微生物几丁质酶基因的克隆现状

1.4微生物几丁质酶的转基因研究

1.5微生物几丁质酶在分子生物学其他方面的研究进展

1.6几丁质酶在其他方面的应用研究

1.7微生物几丁质酶抗血清的研究

1.8球孢白僵菌几丁质酶的研究进展

1.8.1球孢白僵菌及其杀虫作用

1.8.2球孢白僵菌的杀虫作用与几丁质酶的关系

1.8.3球孢白僵菌几丁质酶的研究现状及展望

二、引言

2.1研究意义与背景

2.2论文思路设计

2.2.1球孢白僵菌几丁质酶的纯化

2.2.2球孢白僵菌几丁质酶抗血清的制备

三、材料与方法

3.1材料

3.1.1实验材料

3.2方法

3.2.1几丁酶的检测

3.2.2蛋白质浓度测定

3.2.3胶体几丁质的制备

3.2.4球孢白僵菌几丁酶的诱导

3.2.5球孢白僵菌实验菌株的比较

3.2.6球孢白僵菌产几丁酶的时间曲线

3.2.7球孢白僵菌几丁酶的纯化

3.2.8纯化几丁质酶的电泳鉴定及分子量确定

3.2.9聚丙烯酰胺凝胶薄层等电聚焦电泳(IEF-PAGE)

3.2.10几丁酶N-端氨基酸序列的测定及分析

3.2.11几丁酶抗血清的制备

四、结果与分析

4.1 NAG标准曲线的制定

4.1.1球孢白僵菌产几丁质酶菌株的比较

4.1.2球孢白僵菌几丁质酶的诱导

4.1.3.球孢白僵菌内切几丁质酶Bbchitl的纯化

4.1.4内切几丁质酶Bbchitl的性质测定

4.1.5内切几丁质酶Bbchitl的氮端氨基酸序列测定

4.1.6 Bbchitl与其他几丁质酶的相似性分析

4.2几丁质酶Bbchitl抗血清的制备及效价测定

五、讨论

5.1纯化过程中检测反应体系的建立

5.2纯化方案的优化及纯化技术在纯化过程中的掌握

5.3纯化几丁质酶

结论

1.Bbl-1几丁质酶的纯化及N-端氨基酸序列的测定

2.Bbchitl几丁质酶抗血清的制备

参考文献

致谢