莲雾（Syzygium samarangense）ISSR分子标记及其LFY同源基因DNA片段的克隆

摘要

本文针对以上两个影响莲雾栽培推广的主要问题，本研究以“黑珍珠”莲雾为试材，对ISSR-PCR反应体系中几个主要影响因子进行了优化筛选。　　 利用优化的实验体系，首次对12份莲雾资源和2个莲雾近缘种(蒲桃(S.jambos)和马六甲蒲桃(S.malaccense))进行了ISSR分子鉴别和亲缘关系分析。　　 根据目前报道的LFY同源基因氨基酸序列保守区设计了一对简并引物,以“黑珍珠”莲雾基因组DNA为模板进行特异PCR扩增，并克隆到pGEM-TEasy载体。经测序并对序列进行分析表明，首次成功获得了LFY同源基因3'端的一个片段(SsLFY)，长518bp，其序列已提交GeneBank登记。以上研究结果为今后开展莲雾遗传育种研究和成花机理的分子生物学研究，以及LFY同源基因全长序列的克隆奠定了基础。

目录

文摘

英文文摘

第1章文献综述

1.1分子标记的种类

1.1.1基于DNA-DNA杂交的分子标记

1.1.2基于PCR的分子标记

1.1.3基于单核苷酸多态性的分子标记

1.2常见分子标记及其在果树上的应用

1.2.1 RFLP及其在果树上的应用

1.2.2 RAPD及其在果树上的应用

1.2.3 AFLP及其在果树上的应用

1.2.4 SSR及其在果树上的应用

1.2.5 ISSR及其在果树上的应用

1.2.6其它DNA分子标记及其在果树上的应用

1.3果树基因克隆方法

1.3.1功能克隆法

1.3.2定位克隆法

1.3.3转座子标记法和T-DNA标记法

1.3.4 mRNA差异表达克隆法

1.3.5表型克隆法

1.3.6 PCR扩增克隆

1.3.7基于EST的基因克隆

1.3.8几种常用果树基因克隆方法的选择

1.4成花相关基因研究现状

1.4.1控制植物花发育过程的基因

1.4.2植物MADS盒基因家族

1.5国内外莲雾生产和研究现状

1.5.1栽培历史和分布

1.5.2栽培和生产价值

1.5.3国内外研究现状

第2章引言

第3章莲雾ISSR反应体系的优化及亲缘关系分析

3.1材料与方法

3.1.1材料

3.1.2实验方法

3.2结果与分析

3.2.1基因组DNA的检测与定量

3.2.2 ISSR反应体系的优化

3.2.3引物筛选

3.2.4亲缘关系分析

第4章莲雾LFY同源基因DNA片段的克隆

4.1材料与方法

4.1.1实验材料

4.1.2实验方法

4.2结果与分析

4.2.1 PCR产物的扩增和克隆

4.2.2基因序列与同源性分析

第5章结论与讨论

5.1结论

5.1.1 ISSR-PCR反应体系的优化

5.1.2亲缘关系分析

5.1.3莲雾LFY同源基因DNA片段的克隆

5.2讨论

5.2.1 DNA提取方法的探讨

5.2.2甲酰胺对ISSR-PCR的影响

5.2.3 ISSR引物扩增的规律性研究

5.2.4有关莲雾品种(品系)间亲缘关系的探讨

5.2.5重组质粒的电泳检测

5.2.6莲雾LFY同源基因DNA片段的克隆

参考文献

缩写词英汉对照表

附录

致谢

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