桂枝汤双向调节体温的作用机理研究——对下丘脑PKA、PKC、CREB活性影响及蛋白组学研究

摘要

桂枝汤是张仲景《伤寒论》之主方,专为太阳中风表虚证而设.调和营卫,是本方的主要功效.调和营卫的现代解释,就是对机体紊乱功能的双向调节功能.围绕其双向调节的作用,我们课题组开展了对桂枝汤长达近二十年的研究工作,先后就桂枝汤对体温、汗腺分泌、胃肠功能、免疫功能、血压等机体某一机能处于偏亢或偏抑的不同状态进行了研究,显示了其双向调节的作用,特别是对体温的作用研究较为深入.本课题正是在以往桂枝汤对体温双向调节研究成果的基础上,就桂枝汤对cAMP/PKA、DG/PKC两条信号转导通路上起重要作用的蛋白激酶PKA、PKC的活性变化,及其如何调控核转录因子而发挥调节体温的作用,并对桂枝汤调节体温的蛋白组学基础做了初探.通过桂枝汤对EP3激动剂诱导的高体温大鼠的影响,探讨了其解热作用机制.实验结果显示,cAMP/PKA、DG/PKC两条信号转导通路,以及cAMP反应蛋白结合元件CREB的磷酸化均参与了大鼠体温升高的调节;下调PKA、PKC的活性,抑制CREB的磷酸化,是桂枝汤发挥解热的作用机制之一.通过桂枝汤对氨基比林诱导的低体温大鼠的影响,探讨了其升温作用机制.实验结果显示,PKA、PKC活性的降低介导了大鼠的体温下降,上调PKA、PKC的活性是桂枝汤升高体温的作用机制之一.运用蛋白质组学的双向电泳技术,初步探讨了发热大鼠下丘脑蛋白质组的表达变化.通过比较分析正常、发热及桂枝汤干予大鼠下丘脑蛋白质组双向电泳图谱,可见有不少差异蛋白点的表达.差异蛋白数量约占可分辨蛋白质点的4.5％(正常与模型比较)和2.3％(模型与桂枝汤干预比较).其差异主要表现为蛋白表达量的增加或减少,以及个别蛋白质点等电点的改变.所示差异蛋白的等电点多在5~8之间,个别蛋白等电点的改变,有可能是发热状态下某些蛋白质分子发生修饰所致.这些差异蛋白质分子量多在13~33 kD之间,为一些中低相对分子量蛋白质.这些蛋白质或许是在细胞信号转导过程中起作用的调节蛋白,有可能是桂枝汤发挥解热功用的靶点.且本次实验还在模型大鼠中(与正常比较)发现一个明显的新蛋白质点(MW 22.79KD),我们将在今后通过生物质谱以明确其结构和性质.

目录

文摘

英文文摘

献给

英文缩略词

附图

前言

第一章高、低体温动物模型复制及桂枝汤的作用

1.桂枝汤、PKA和PKC抑制剂对EP3受体激动剂致大鼠发热模型的影响

2.低体温大鼠模型的选择及桂枝汤对其的影响

第二章桂枝汤及桂皮醛对蛋白激酶A、蛋白激酶C活性的影响

1.材料

2.方法

3.结果

3.1桂枝汤、桂皮醛对发热和低体温大鼠下丘脑蛋白激酶A活性的影响

3.2桂枝汤、桂皮醛对发热和低体温大鼠下丘脑蛋白激酶C的影响

第三章桂枝汤及其有效成分对转录因子CREB的影响

1.材料与仪器

2.方法

3.结果

第四章桂枝汤对发热大鼠下丘脑组织蛋白质组的影响

1.材料

3.结果

讨论

结论

参考文献

致谢

博士期间发表论文

博士后期间发表论文

简历

桂枝汤对发热大鼠下丘脑蛋白质组影响初探

发热大鼠下丘脑组织中蛋白质组双向电泳图谱初步分析