益肺宣肺降浊方对血管性痴呆大鼠cAMP/PKA-CREB信号通路CREB和p-CREB影响的研究

摘要

目的：　　观察益肺宣肺降浊方对血管性痴呆大鼠的学习记忆、病理学形态学的影响，并探讨益肺宣肺降浊方对cAMP/PKA-CREB信号通路的CREB蛋白和p-CREB蛋白的调节作用。　　方法：　　健康雄性SPF级SD大鼠210只，体重250±50g，通过反复三次线夹闭双侧颈总动脉来造成缺血再灌注，通过两次水迷宫筛选出成功的VD模型大鼠。在分组安排方面，将所有造模后VD大鼠通过水迷宫数据进行智力分层，然后按智力分层随机分为假手术组、模型组、石杉碱甲组、脑复康组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组 7个组。7个实验组进行4周的相应处理后，各组VD大鼠进行第三次6天的水迷宫测试，观察各组找到平台的潜伏期和穿越平台的次数变化。随后，腹腔注射麻醉大鼠，一部分大鼠经心脏灌注生理盐水和多聚甲醛，断头取脑，用于HE染色切片制作；一部分大鼠经心脏灌注生理盐水、戊二醛溶液后，断头取脑切片保存，用于电子显微镜观察；余下大鼠直接断头取脑后，用于 Western Blotting 检测各药物组 CREB 和 p-CREB的变化及细胞凋亡检测。　　结果：　　本实验的造模方式经Morries水迷宫数据统计学分析，证明此造模方式是成功的。经过4周药物处理后，水迷宫数据统计分析后发现，与假手术组相比较，模型组大鼠找到平台的潜伏期明显延长，找到平台的次数明显减少（P＜0.05）；各药物组的大鼠找到平台的潜伏期和穿越平台的次数均有所改善，与模型组相比，中药高剂量组和石杉碱甲组找到平台的潜伏期明显减少，穿越平台的次数明显增加（P＜0.05）；与石杉碱甲组相比，中药高剂量组的潜伏期及穿越平台的次数无明显差异，统计学无意义（P＞0.05）。HE 染色切片及电子显微镜片，发现各药物组神经细胞损伤均有不同程度的减轻及细胞凋亡的情况减少，尤其是中药高剂量组和石杉碱甲组的效果最好。Western Blotting检测发现，肺宣肺降浊方高剂量组中CREB和p-CREB的有表达明显增加，接近假手术组。　　结论：　　益肺宣肺降浊方能改善VD大鼠的行为学症状，并具有一定的保护神经细胞的作用，又能调节 CREB蛋白和p-CREB蛋白表达。

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