健脾益肾解毒法防治胃癌复发转移作用及对凋亡信号传导的调控机制

摘要

胃癌(gastriccancer)是威胁人类生命健康常见的恶性肿瘤之一，手术后复发转移是导致治疗失败的一个重要因素，如何减少或防止复发转移，提高生存质量，延长生存期，是目前胃癌研究领域中最迫切的课题。导师孙桂芝教授是工作在中西医结合防治肿瘤战线著名的专家，特别是在治疗以胃癌为主的消化系统肿瘤方面有其独到之处，近40年治疗肿瘤患者达50余万人次。本论文在对胃癌及肿瘤转移认识的历代大量文献梳理基础上，对导师防治胃癌复发转移方面的临床经验，用现代科学手段进行了深入挖掘，并以615小鼠前胃癌术后复发转移模型为载体，采用流式细胞技术(FCM)、TUNEL、AV-PI、RealtimeRT-PCR、免疫组化(IHC)等技术，从整体—细胞—基因分子—信号传导等层次，深入探讨了健脾益肾解毒法防治胃癌术后复发转移的分子机制，从一个侧面揭示了中医药防治胃癌术后复发转移理论依据和导师临床治验的科学内涵。 一、理论研究1历代医家著述对后世胃癌及肿瘤转移中医治疗学具有指导意义通过祖国医学对胃癌及肿瘤转移的认识历代文献梳理，可以看出，中医对这类病证的认识分为五个时期，(1)春秋战国以前为萌芽时期，此时虽没有具体到对于胃癌及转移的认识，但对于相关病证已有初步的认识。(2)春秋战国至东汉末年，为初步形成时期，对于胃癌相关的症状，病因与发病，诊治与预后的有了一定的认识。(3)晋、隋、唐是研究与发展时期，关于胃癌相关病证的体征上有了更深一步的描述，治疗上出现了更多的方法。(4)宋金元是充实时期，这个时期产生了诸多医学流派，也产生了很多学术观点，充实了胃癌相关病症认识。(5)明、清是一个系统与初步完善时期，出现了许多关于前人观点的系统记载的著作，不论是在理论上，还是临床运用上都达到了系统与初步完善的程度。充分挖掘祖国医学文献这一宝库，并以此为切入点，探讨现代中医胃癌转移辨证论治规律并指导临床实践，将对当代胃癌转移中医治疗学的发展具有重要意义。 2导师孙桂芝教授防治胃癌复发转移学术经验导师根据治病求本、扶正祛邪的指导思想，结合胃癌术后患者“本虚标实”的证候特点，(1)倡导以健脾益肾解毒为主的治疗大法，遣方用药攻补兼施；(2)诊断以辨病为先，治疗以辨证为主；(3)提出防治并重，长期服药巩固疗效；(4)强调注意饮食生活调摄。大量的临床实践显示长期坚持健脾益肾解毒法中医药治疗具有改善胃癌患者生存质量，抑制癌细胞复发转移，稳定和缩小瘤体，延长生存期的作用。 二、临床研究1导师孙桂芝教授防治胃癌复发转移临床药证研究利用数据挖掘生物信息技术，以导师使用方药为线索，对临床治疗胃癌的351张原始处方从多个角度进行分析对比、综合归纳，以药证为纲领，以导师理论精髓为依据，发掘导师“随证用药”的规律。其处方药证规律总结如下：(1)在“以法统方”的基础上，根据胃癌辨证六个基本证型，常用基础方分别是：四君子汤、小陷胸汤、生脉散和玉女煎、橘皮竹茹汤、三仁汤、柴胡疏肝散。(2)遣方用药中涉及214味药物，根据出现频次和频率分布归纳总结了23味最为常用药物，将它们重新组合成方，充分体现了导师扶正祛邪并举防治胃癌学术思想的核心内涵。(3)常用23味中药按药性理论进行分析，性温性平味甘的药物的使用处于较稳定的高水平，说明温补是导师临床治疗胃癌常用治法，与其认为胃癌以脾胃虚寒者居多相符合。另外苦寒药次之，说明清热解毒是其临床常用治法之二。两者相合，充分体现了攻补兼施的原则。(4)六组基础方中常见61味药物按其功能分类，其中补虚药居首位，清热解毒药、活血化瘀药、理气药使用次之，同时采用理气、温里、化湿、化痰等从多方面多层次治疗，一方面说明胃癌防治的复杂性，另一方面说明导师在辨证论治基础上遣方用药，主次分明，组合有绪。(5)临床常用药对实为用药精华之所在。(6)不但辨证论治，依据中医药理论选方用药；而且辨病论治，结合中医药的现代药理研究进展，重视一药多用，体现了中西医结合理论防治胃癌复发转移的优势。 2健脾益肾解毒法对进展期胃癌术后患者生存质量影响的临床研究为了更系统、更全面评价健脾益肾解毒法对进展期胃癌术后患者生存质量(QOL)的影响，探讨其在治疗和康复过程中的作用，旨在为综合治疗干预提供理论依据。采用EORTCQLQ-C30核心量表测评健脾益肾解毒法对46例进展期胃癌术后患者治疗前后QOL的影响。按治疗前后各领域(子量表)标准化得分计算，进展期胃癌患者经历手术和化疗后，应用健脾益肾解毒法组方汤药治疗3-6个月，不但可以明显提高总体健康和生存质量，而且在生存质量量表的多个领域均有显著改善，突出表现在物理症状、角色功能、情绪功能、社会功能和身体功能方面。以上几个领域通过主成分分析正是此量表中第一主成分，从而更加说明该治法在改善生存质量方面的积极贡献。本研究结果表明进展期胃癌术后患者坚持长期健脾益肾解毒法中医药治疗必将受益，同时也表明在一个理想的肿瘤综合治疗方案中，中医药疗法是必不可少的。 三、实验研究本课题实验研究以615小鼠前胃癌术后复发转移模型为载体，采用流式细胞技术(FCM)、TUNEL、AV-PI、RealtimeRT-PCR、免疫组化(IHC)等多种技术方法，从整体—细胞—基因分子—信号传导等层次，深入探讨了该治法所组JYJF防治胃癌术后复发转移的分子机制，从一个侧面揭示了攻补兼施并重的治则防治肿瘤复发转移的科学内涵。 1建立和临床术后复发转移相类似的615小鼠前胃癌术后复发转移动物模型，为动态观察术后复发转移，研究复发转移机制及治疗奠定了基础。 2中药复方JYJF对于615小鼠前胃癌术后局部复发和远处肺转移有一定的抑制作用(复发瘤抑制率为63.11﹪和肺转移抑制率为27.8﹪)，特别能明显控制复发转移的程度，提高生存质量，延长生存期(生命延长率为94.44﹪)。 3应用不同检测凋亡的方法，证实改变肿瘤细胞和机体T淋巴细胞凋亡的敏感性是JYJF防治复发转移的重要作用机制。 4中药复方JYJF可以提高T淋巴细胞的增殖能力，降低T细胞的凋亡能力，表现在可以降低T细胞的Fas表达，提高FasL表达，从而提高机体免疫系统的监视能力，降低肿瘤细胞免疫逃逸。通过对T淋巴细胞增殖和凋亡两方面的检测可以较全面评价机体细胞免疫状态，为预防肿瘤复发转移提供新的思路。 5细胞凋亡信号传导紊乱是肿瘤发生复发转移的重要机制之一，中药复方JYJF可以通过共同调控Fas死亡受体途径和线粒体途径，最终激活凋亡效应型Caspase-3引起肿瘤细胞凋亡。 6中药复方JYJF防治复发转移的作用可能分子机制在于可以促进肿瘤细胞凋亡信号转导基因Fas蛋白和mRNA表达，降低FasL蛋白和mRNA表达；进而提高起始型Caspase-8的活性；同时提高凋亡调控基因Bax蛋白和mRNA表达，降低Bcl-2/Bax比例，从而减弱Bcl-2蛋白和mRNA表达抑制细胞凋亡的作用，降低肿瘤细胞线粒体膜电位△ψm和降低细胞内PH值，使细胞酸化，通过线粒体途径有效地放大了凋亡信号；最终活化Caspase-3导致细胞凋亡。这些为中药复方的多靶点效应增添了实验依据。 四、本研究特色和创新之处1临床研究中，把中医理论思维与数据挖掘技术相结合，以临床治疗胃癌原始处方为线索，进行分析对比、综合归纳，以药证为纲领，寻找随证用药的规律，揭示了导师孙桂芝教授扶正祛邪并举防治胃癌复发转移学术思想的科学内涵。为继承挖掘名老中医临床经验提供新思路。未见同类研究报道。 2实验研究中，以动物体内实验为对象，从机体淋巴细胞和肿瘤细胞两方面，从复发和转移两个角度，从外源性和内源性两个途径，研究细胞凋亡信号传导紊乱与肿瘤复发转移的相关性，及健脾益肾解毒法对其调控的分子机制，揭示攻补兼施治则的科学性，为防治肿瘤复发转移治则治法研究提供了新的实验依据。 3首次应用EORTCQLQ-C30(V3.0)量表测评中药复方维护和改善进展期胃癌术后患者的生存质量，使中药复方疗效评价更加客观化和量化，是本研究方法学特色之一。 4建立和临床肿瘤术后复发转移相类似的小鼠前胃癌术后复发转移动物模型，为动态观察肿瘤术后复发转移奠定了基础，是本研究方法学特色之二。

目录

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英文缩略语

文献综述一中晚期胃癌术后复发转移的诊断与治疗进展

文献综述二细胞凋亡信号传导与肿瘤的侵袭和转移

文献综述三孙桂芝教授防治胃癌转移复发临床常用中药现代药理研究进展

前言

上篇理论研究

中篇临床研究

第一章孙桂芝教授防治胃癌复发转移临床药证研究

第二章健脾益肾解毒法对进展期胃癌术后患者生存质量影响的临床研究

下篇实验研究

前言

第一章近交系615小鼠前胃癌(MFC)术后复发转移模型的建立

第二章健脾益肾解毒方对小鼠前胃癌(MFC)术后复发转移及生存期的观察

第三章健脾益肾解毒方对小鼠前胃癌(MFC)术后复发转移T淋巴细胞增殖和凋亡相关蛋白的影响

第四章健脾益肾解毒方对小鼠前胃癌(MFC)术后复发转移细胞凋亡的影响

第五章健脾益肾解毒方对小鼠前胃癌(MFC)术后复发转移Fas/FasL、Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

第六章实时荧光定量PCR检测肺转移灶Fas/FasL，Bcl-2/Bax mRNA表达

第七章健脾益肾解毒方对小鼠前胃癌(MFC)术后复发细胞凋亡信号传导的调控作用

问题和展望

实验研究小结

结语

附件：EORTC QLQ-C30(第三版)生活质量调查问卷

致谢

研究生个人简历