赵绍琴教授经验方抗大鼠肾小球硬化的实验研究

摘要

研究背景
　　 慢性肾功能衰竭(Chronicrenalfailure,CRF)是各种慢性肾脏疾病的共同转归,是各种病因引起的肾脏损害和进行性恶化的结果。延缓CRF的进展是本病防治的重要环节。肾小球硬化(glomerulosclerosis,GS)是CRF的进展过程中的重要病理特征,因而如何干预GS的发展成为延缓CRF进展的研究热点之一。研究发现细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)的合成增多、降解减少,导致过多的ECM积聚是肾小球硬化的主要特征。中药复方可通过多种途径抑制ECM的合成增加,防止肾小球硬化,延缓其发展,进而延缓肾功能衰竭进展。
　　 CRF临床证候学研究表明,CRF的证候包括正虚与邪实两方面,近年来许多的学者开始重视邪实证候在CRF发病中的意义,虽然有关CRF中医邪实证候的分布规律的研究结果略有不同,但均认为湿热与瘀血为CRF中最常见的邪实证候。临床研究也发现清热化湿、活血化瘀中药能够有效延缓CRF的进展,但相关的实验研究尚不深入。
　　 已故北京中医药大学赵绍琴教授是我国著名的中医药学家,精于温病学的理论和临床,并将温病学的论治方法运用于内科疑难杂症的治疗之中,在运用中医药治疗CRF方面积累了宝贵经验,认为CRF是因为湿热留着于内,粘滞不去,导致气化不利,升降欠和,日久则瘀阻肾络,血行不畅,形成瘀血,或湿郁不去,热入血分,致气血同病,进而损害肾主水与司气化的功能,导致本病病程缠绵和肾功能进行性恶化；认为其病本质以邪实为主,多湿热、多瘀血,主张祛邪治病,常以清化湿热,凉血化瘀之法贯穿CRF治疗的始终。
　　 目前赵绍琴教授从“湿热伤血”论治CRF的学术思想已得到初步总结,其基本经验方延缓CRF进展的有效性已经临床和初步实验研究所证实。但尚未对“基本经验方”防治肾小球硬化的作用开展研究。
　　 实验目的
　　 本研究从病理形态学角度初步探讨赵绍琴教授“基本经验方”抗肾小球硬化的作用,以便为临床运用“基本经验方”提供进一步的实验依据,同时也为今后研究其分子生物学机制奠定基础。
　　 实验方法
　　 1.模型制作及分组方法:
　　 将Wistar系雄性大鼠60只随机分为正常对照组9只、假手术组9只、模型组42只,采用5／6肾切除法制作肾小球硬化模型。术后4周检测血肌酐、尿素氮、24小时尿蛋白定量等指标,确认模型成功后,将模型组存活的32只大鼠按照体重排序随机分为模型对照组10只、尿毒清组11只、经验方组11只。
　　 2.给药方法:
　　 正常组、假手术组、模型对照组均给予蒸馏水1ml／100g／d；尿毒清组给予尿毒清颗粒(广州康臣药业有限公司生产,批号:20090422)375mg／ml／100g／d；经验方组给予赵绍琴教授经验方(由荆芥炭10g、大黄炭10g、防风6g、生地榆10g、炒槐花10g、丹参12g、焦三仙各10g组成,由中国中医科学院望京医院药理实验室制备汤剂)917mg／ml／100g／d。
　　 3.观察周期:
　　 中药治疗持续4周(术后8周)后采用颈椎脱臼法处死大鼠。
　　 4.观察指标:
　　 检测血肌酐、尿素氮、24小时尿蛋白定量等指标。大鼠肾脏组织,采用HE、PAS染色,通过图像采集软件(MVC2000-39Microview)采集病理图片,根据Raij等的半定量方法评估肾小球硬化指数(glomemlosclerosisindex,GSI)；采用MoticMed6.0数码医学图像分析系统分析肾小球PAS染色阳性的基质面积、肾小球总面积,以求得基质阳性面积比值(阳性面积／肾小球总面积)。
　　 5.统计分析方法:
　　 采用SPSS(V15.0)统计软件进行统计分析。所有计量资料以均数±标准差(X±S)表示。采用Shapiro-Wilk法对各组数据进行正太性检验;levene法进行方差齐性检验；各组数据均服从正态分布且方差齐者,采用单因素方差分析(One-wayANOVA)进行组间比较,差异有统计学意义时,进行两两比较,采用LSD法；资料不服从正态分布或方差不齐时采用秩和检验,差异有统计学意义时采用Nemeny法进行两两比较。以P<0.05认为差异有统计学意义。
　　 实验结果
　　 1.给药前肾功能及24小时尿蛋白定量结果:
　　 给药前正常组血肌酐与假手术组比较,差异无统计学意义,P>0.05；正常组、假手术组血肌酐与模型组、尿毒清组、经验方组比较,差异均有统计学意义,P<0.05；模型组血肌酐与尿毒清组、经验方组比较,差异均无统计学意义,P>0.05；尿毒清组血肌酐与经验方组比较,差异无统计学意义,P>0.05。
　　 正常组尿素氮与假手术组比较,差异无统计学意义,P>0.05；正常组、假手术组尿素氮与模型组、尿毒清组、经验方组比较,差异均有统计学意义,P<0.05；模型组尿素氮与尿毒清组、经验方组比较,差异均无统计学意义,P>0.05；尿毒清组尿素氮与经验方组比较,差异无统计学意义,P>0.05。
　　 正常组24小时尿蛋白定量与假手术组比较,差异无统计学意义,P>0.05；正常组、假手术组24小时尿蛋白定量与模型组、尿毒清组、经验方组比较,差异均有统计学意义,P<0.05；模型组、尿毒清组、经验方组之间24小时尿蛋白定量比较,差异均无统计学意义,P>0.05。
　　 2.给药后肾功能及24小时尿蛋白定量结果:
　　 给药后模型组血肌酐明显高于经验方组,差异有统计学意义,P<0.05;尿毒清组亦高于经验方组,差异有统计学意义,P<0.05；正常组血肌酐低于模型组、尿毒清组、经验方组,差异均有统计学意义,P<0.05。
　　 模型组尿素氮明显高于经验方组,差异有统计学意义,P<0.05；尿毒清组亦高于经验方组,差异有统计学意义,P<0.05；正常组尿素氮低于经验方组,差异无统计学意义,P>0.05。
　　 模型组24小时尿蛋白定量明显高于经验方组,差异有统计学意义,P<0.05；高于尿毒清组,差异有统计学意义,P<0.05；尿毒清组24小时尿蛋白定量高于经验方组,差异无统计学意义,P>0.05；正常组低于模型组、尿毒清组、经验方组,差异有统计学意义,P<0.05。
　　 3.给药后肾小球硬化指数与基质阳性而积比值结果:
　　 肾小球硬化指数,模型组高于经验方组,差异有统计学意义,P<0.05；尿毒清组高于经验方组,差异有统计学意义,P<0.05；模型组与尿毒清组比较,差异无统计学意义,P>0.05；正常组低于与模型组、尿毒清组、经验方组,差异均有统计学意义,P<0.05。
　　 基质阳性面积比值,模型组高于经验方组,差异有统计学意义,P<0.05；尿毒清组高于经验方组,差异有统计学意义,P<0.05；模型组与尿毒清组比较,差异无统计学意义,P>0.05;正常组低于模型组、尿毒清组、经验方组,差异均有统计学意义,P<0.05。
　　 结论
　　 1.赵绍琴教授经验方能够有效延缓5／6肾切除CRF模型大鼠肾功能衰竭的进展,其作用优于对照药物尿毒清颗粒。
　　 2.赵绍琴教授经验方能够减少5／6肾切除CRF模型大鼠尿蛋白的排泄,尿毒清颗粒具有同样作用,两者差异无统计学意义。
　　 3.赵绍琴教授经验方能有效抑制5／6肾切除CRF模型大鼠肾小球细胞外基质的增生,从而延缓肾小球硬化的进展,其作用优于对照药物尿毒清颗粒。