还脑益聪方对APP/PS1双转基因痴呆模型小鼠PS1及NCT基因调控通路的影响

摘要

目的：
　　 观察APP/PS1双转基因痴呆模型小鼠学习记忆能力及脑组织海马早老蛋白相关基因表达的变化，探讨还脑益聪方干预痴呆模型小鼠的药理作用及其可能的作用机制。
　　 方法：
　　 选取3月龄APP/PS1双转基因痴呆模型小鼠50只随机分为模型组、西药组、还脑益聪方（HNYCF，由制首乌、人参、川芎、黄连、石菖蒲组成）低剂量组、中剂量组及高剂量组，每组10只，另取3月龄相同遗传背景的C57BL/6J小鼠10只作为正常对照组，各组灌胃给药，每日一次，连续灌胃3个月，正常组和模型组灌胃等体积蒸馏水，西药组灌胃盐酸多奈哌齐(0.65mg/kg)水溶液，中药各剂量组分别按照5.46g生药/kg、10.92g生药/kg、21.84g生药/kg灌胃给药，给药结束后进行水迷宫实验观察不同组别学习记忆和认知功能的变化，HE染色观察脑组织海马CA1区病理形态的变化，免疫组织化学法观察小鼠海马组织中磷酸化APP和Aβ1-42的含量。RT-PCR法检测小鼠海马组织中PS1、CHIP、CDC42、NCT、AP-1、NFAT等相关基因mRNA的表达。
　　 结果:
　　 水迷宫实验结果表明，与正常组比较，模型组小鼠潜伏期显著延长(P＜0.01)，游泳路程显著增长(P＜0.01)，穿台次数及第四象限游泳路程均显著减少(P＜0.01)。服用HNYCF后，与模型组比较，各给药组小鼠的潜伏期显著缩短（P＜0.05或P＜0.01），游泳路程显著缩短（P＜0.05或P＜0.01）;各给药组穿台次数显著增加（P＜0.05或P＜0.01），HNYCF低、中、高剂量组第四象限路程均显著增加(P＜0.05)。
　　 小鼠脑组织病理形态显示，正常组小鼠海马CA1区神经元染色均一，细胞密集、排列整齐，细胞膜清晰，核仁比较明显;模型组海马CA1区神经元数量明显减少，细胞稀疏、排列紊乱，部分细胞胞体缩小，胞膜核膜界限不清晰，部分细胞出现空泡变性，甚至坏死;经药物治疗3个月后，与模型组相比，各用药组海马CA1区神经元数量较多，细胞排列较为致密整齐，偶见空泡变性、细胞核固缩，少有细胞坏死，以HNYCF中剂量组形态变化最为明显。
　　 小鼠海马CA1区磷酸化APP及Aβ1-42表达的免疫组化染色显示，各组小鼠海马CA1区细胞均有不同程度的棕黄色染色，与正常组比较，模型组小鼠磷酸化APP和Aβ1-42表达显著增多(P＜0.01);用药3月后，与模型组比较，HNYCF低、中、高剂量组小鼠海马CA1区磷酸化APP和Aβ1-42表达均有不同程度的降低(P＜0.01或P＜0.05)。
　　 RT-PCR结果显示:与正常组比较，模型组及各用药组小鼠的PS1 mRNA及CHIP mRNA表达均显著升高（P＜0.01或P＜0.05）;用药3月后，与模型组比较，HNYCF低剂量组、中剂量组及高剂量组PS1 mRNA和CHIP mRNA表达均显著降低（P＜0.01或P＜0.05），且HNYCF中剂量组降低最为明显;各组CDC42 mRNA表达无显著性差异(P＞0.05)。与正常组比较，模型组及各用药组小鼠的NCT mRNA、AP-1 mRNA及NFAT3 mRNA表达均无显著性差异(P＞0.05);用药3月后，与模型组比较，各用药组小鼠的NCT mRNA、AP-1 mRNA及NFAT3 mRNA表达均无显著性差异(P＞0.05)
　　 结论:
　　 APP/PS1双转基因痴呆模型小鼠6月龄时已经表现出明显的记忆和认知功能障碍，脑组织内有神经元的损伤和病理形态改变，热休克蛋白70羧基端作用蛋白(CHIP)基因表达异常。
　　 还脑益聪方能明显改善APP/PS1双转基因痴呆模型小鼠的学习和记忆功能，保护其海马CA1区神经元结构和功能，其可能的机制为通过抑制CHIPmRNA的表达来降低PS1 mRNA的稳定性及活性，从而抑制Y分泌酶的产生和活性，减少APP的分解和Aβ（尤其是Aβ1-42）的沉积，从而改善小鼠的认知功能。

目录

声明

英文缩略词表

摘要

综述一 APP／PS2双转基因痴呆模型小鼠研究进展

1 病理生理特点

2 相关基因与AD

3 APP／PS1双转基因小鼠痴呆模型应用进展

4 药物干预方面的研究

5 小结和展望

综述二 中医药干预APP／PS1双转基因痴呆模型小鼠研究进展

1 APP／PS1双转基因痴呆模型的特点

2 APP／PS1双转基因痴呆模型在中医药领域的应用

3 小结

前言

1 材料及方法

2 结果

3 讨论

4 结论

附图

参考文献

致谢

个人简历