母婴分离小鼠中枢星形胶质细胞的变化及温阳解郁方对其的调节研究

摘要

目的：
　　早年不良经历，如幼年创伤、母爱缺乏、早年遭受虐待等，可增加多种精神情感障碍的易感性，其病理机制尚未完全清楚。随着对星形胶质细胞功能研究的不断深入，发现其在精神障碍发病中起着越来越重要作用，已成为抑郁症病理生理机制研究的一个新热点。母婴分离动物模型是早年不良经历所致成年后抑郁障碍病理生理机制研究的重要工具。前期研究显示，温阳解郁方对母婴分离小鼠的行为异常、HPA功能亢进、神经递质改变及神经可塑性降低有着良好的调节作用。因此，探索母婴分离对不同时间节点小鼠大脑星形神经胶质细胞的影响，以及温阳解郁方对发育期和成年期母婴分离小鼠大脑星形胶质细胞变化的调节作用，可为早年不良经历相关病症的早期防治提供依据。
　　方法：
　　1.以小鼠出生作为PD0，在PD5-PD14，进行8h/d的母婴分离(MS)，在母婴分离10天后(PD15)、离乳后(PD24)、40天龄(PD40)、2月龄(PD60)、3月龄(PD90)，灌注固定取脑，行连续病理切片，采用免疫组织化学标记法，以胶质纤维酸性蛋白(GFAP，glial fibrillary acidic protein)标记星形胶质细胞，与未经母婴分离的正常对照组(NC)比较，观察母婴分离子代小鼠不同发育阶段海马区星形胶质细胞的形态及数量变化。
　　2.将经过母婴分离仔鼠随机分为母婴分离对照组(MS)、温阳组(Wenyang)、解郁组(Xiaoyao)、温阳解郁组(XSF)及氟西汀组(FLU)，分别在离乳至(PD21)成年（3月龄，PD90）和成年期，给予相应的药混饲料（Wenyang用二仙汤2.52g/kg、Xiaoyao用逍遥散3.85g/kg、XSF用温阳解郁方5.25g/kg、FLU用氟西汀20mg/kg）喂养进行干预（成年期干预4周），通过旷场与自由活动实验、O迷宫和社会交互认知行为实验检测，确定其行为模式，通过GFAP表达观察其大脑星形胶质细胞形态学变化。
　　结果：
　　发育期星形胶质细胞观察
　　免疫组化实验结果显示，在PD15-PD90阶段，MS小鼠海马各区GFAP表达量均呈增多趋势;在PD60前各时间点，GFAP均低于正常对照小鼠，其中PD15差异有统计学意义(P＜0.05)。在CA3区，PD90的MS小鼠其GFAPIOD值较NC显著增多（P＜0.01）;在DG区，PD90的MS小鼠GFAP IOD值较NC有上升趋势，但差异无统计学意义。
　　发育期温阳解郁方对母婴分离小鼠行为模式及星形胶质细胞的影响
　　1.在旷场与自由活动实验中，MS小鼠30min总运动路程较NC增加，且差异有统计学意义（P＜0.05），XSF较MS有减少趋势，但差异无统计学意义（P=0.096）。MS小鼠在社会交互行为学实验中训练探察时间和辨别探查时间均有延长，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.05），各给药组均有下调作用(P＜0.05，或P＜0.01)。
　　2.免疫组化实验结果显示，在海马CA1和DG区，MS小鼠GFAP IOD值较NC降低，差异有统计学意义(P＜0.05，P＜0.05)，在海马CA3区，MS小鼠GFAP IOD值较NC有降低趋势，但差异无统计学意义(P=0.072);除在CA1区Wenyang相较于MS，GFAP IOD值有上调趋势，但差异无统计学意义外(P=0.055)，其余各给药组较MS均显著上调(P＜0.05)。
　　成年期温阳解郁方对母婴分离小鼠行为模式及星形胶质细胞的影响
　　1.成年期三方干预中，XSF自由活动实验30min总路程相较MS有减少趋势，但无统计学差异（P=0.081）。社会交互行为学实验中，Xiaoyao和FLU训练探察时间、辨别探查时间较MS有下调作用（P＜0.05）。
　　2.与MS比较，成年期三方干预均对GFAP在海马CA1区表达无显著性影响，Wenyang GFAP在CA3区、DG区表达有上调趋势（P=0.090，P=0.089），Xiaoyao GFAP在DG区表达有上调趋势（P=0.097），但差异均无统计学意义。XSF GFAP在CA3区、DG区显著上调(P＜0.01，P＜0.05)。
　　结论：
　　1.中枢星形胶质细胞数量在出生后2-3周迅速增加，之后缓慢变化至成年;母婴分离可致发育早期小鼠中枢海马各区星形胶质细胞数量减少，至60天龄后接近正常。
　　2.二仙汤和逍遥散均能改善母婴分离小鼠社会认知功能，温阳解郁方可同时调节母婴分离小鼠焦虑水平和社会认知功能;二仙汤、逍遥散及温阳解郁方均对海马星形胶质细胞有显著调节作用，星形胶质细胞可能是三方作用的共同途径。
　　3.从二仙汤、逍遥散、温阳解郁方干预效果看，温阳解郁方与成年后母婴分离小鼠证候方证相合。发育期干预效果更为突出，提示对于早年不良经历者应及早进行干预治疗。

目录

声明

摘要

英文缩略词表

文献综述一

文献综述二

1材料与方法

1．1实验动物

1．2试剂

1．3仪器

1．4实验方法

1．5统计学方法

2结果

2．1脑片GFAP免疫阳性反应物的分布

2．2母婴分离小鼠发育期海马CA1区GFAP的变化

2．3母婴分离小鼠发育期海马CA3区GFAP的麦化

2．4母婴分离小鼠发育期海马DG区GFAP的变化

3讨论

小结

参考文献

实验二温阳解郁方对发育期母婴分离小鼠行为模式及星形胶质细胞的影响

1材料与方法

1．1实验动物

1．2中药、试剂

1．3仪器

1．4实验方法

1．5统计学方法

2结果

2．1旷场与自由活动实验

2．2 O迷宫实验

2．3社会认知行为实验

2．4发育期给药各组海马CA1区GFAP的变化

2．5发育期给药各组海马CA3区GFAP的变化

2．6发育期给药各组海马DG区GFAP的变化

3讨论

小结

参考文献

实验三温阳解郁方对成年期母婴分离小鼠行为模式及星形胶质细胞的影响

1材料与方法

1．1实验动物

1．2中药、试剂

1．3仪器

1．4实验方法

1．5统计学方法

2结果

2．1旷场与自由活动实验

2．2 O迷宫

2．3社会认知行为实验

2．4成年期给药各组海马CA1区GFAP的变化

2．5成年期给药各组海马CA3区GFAP的变化

2．6成年期给药各组海马DG区GFAP的交化

3讨论

小结

参考文献

结论

致谢

个人简历