酒精性肝纤维化中医证候学和调肝理脾方作用机理研究

摘要

酒精性肝纤维化(ALF)是以肝星状细胞(HSC)为主的细胞激活增殖，肝脏的几种效应细胞通过自/旁分泌致病/抗病因子和炎性介质相互作用，使细胞外基质(ECM)各成分合成明显增多，降解相对减少的动态可逆病理过程。酒精性肝纤维化是轻症酒精性肝病、酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化向酒精性肝硬化发展的必经之路，具有可逆性，研究肝纤维化的形成机制是当前研究的热点之一。中医药在防治酒精性肝病方面具有潜在的优势和鲜明的特点。 本课题由理论研究、临床及实验研究三部分组成：理论研究部分，一部分对中医药防治酒精性肝病/肝纤维化进展进行了综述，对导师田德禄教授防治酒精性肝病/肝纤维化的学术思想进行了继承和阐述；另一部分系统论述了现代医学对酒精性肝纤维化防治的研究成果。 临床部分，为多中心前瞻性研究。以符合临床流行病学要求的全国五家医院病例资料为基础，对酒精性肝纤维化患者的临床资料进行调查，探讨酒精性肝纤维化患者中医证候分布的特点；应用主成分分析的方法，研究了199例酒精性肝纤维化患者中医证候特点的分布，以及国内酒精性肝纤维化发病的特点。 实验部分以酒精性肝纤维化大鼠模型为实验对象，对模型大鼠一般生理指标和病理指标进行了动态观察，探讨了酒精性肝纤维化启动期和发展期的病理机制；应用中药复方调肝理脾方对模型大鼠进行干预治疗，并对其抗纤维化的药效学机制进行研究，为临床应用防治酒精性肝纤维化提供理论基础和动物实验的数据资料。 实验研究，主要进行了整体实验。方法：1清洁剂Wistar雄性大鼠共120只，采用“白酒4.8g/(kg·d)、吡唑24mg/(kg·d)、玉米油2ml/(kg·d)”混合物，灌胃配合饲喂高脂饲料(基础饲料：胆固醇：猪大油=79％：1％：20％)的方法制备大鼠酒精性肝纤维化动物模型。分别于造模4w、8w、12w、16w随机采血，分别检测血清ALB、GGTP、AST、ALT、HA、PⅢP、CⅣ、LN含量；取大鼠肝组织常规石蜡包埋、切片行HE染色、Mallory染色； 2以正常大鼠做阴性对照，采用生化分析方法检测酒精性肝纤维化早期(造模16w)；采用超薄切片、光镜观察大鼠肝组织病理变化特点；采用免疫组化法检测肝组织TGF-β1蛋白的表达； 3造模结束(16w)后，大鼠随机分成7组：A.正常对照组(正常大鼠生理盐水灌胃)，B.模型对照组(生理盐水代替药物灌胃)，C.复方调肝理脾方小剂量治疗组，D.复方调肝理脾方中剂量治疗组，E.复方调肝理脾方大剂量治疗组，F.中药对照组(复方鳖甲软肝片)，J.西药对照组(安珐特)，治疗4w后取材。采用生化分析的方法检测血清ALB、AST、ALT、GGTP、PⅢP、CⅣ、LN、HA含量；肝组织常规石蜡切片HE染色、Mallory染色；肝组织石蜡切片TGF-β1免疫组化染色； 4采用SPSS13.0软件对相关实验数据进行统计学处理，求平均数，作单因素方差分析。 结果：通过以上实验得到下列结果：1酒精性肝纤维化启动或进展期，血清中AST/ALT比值及HA含量显著升高； 2酒精性肝纤维化发生过程中伴随肝细胞脂肪、糖和蛋白质代谢紊乱； 3实验性酒精性肝纤维化主要病理特征是汇管区和窦周纤维化； 4复方调肝理脾方抗酒精性肝纤维化的作用机制主要为：4.1促进机体产生大量抗氧化因子，提高机体对自由基的清除能力；4.2保护肝细胞，修复肝细胞损伤，降低转氨酶；4.3显著降低动物血清中CIV型胶原及HA水平，能有效阻止肝纤维化的进程；4.4通过下调TGF-β1蛋白表达而阻断肝纤维化的进行。 结论：通过统计学分析及各指标间关系的深入探讨，研究结论如下：研究结果及结论：(1)临床研究：实验一：男性为主要的饮酒和ALF发病人群；ALF的发病高峰年龄在45岁左右。不同职业人群ALF发生率有所不同，商人、干部最高，分别为38.69％和27.64％；日饮酒量140g/d，饮酒年限20年，累计酒精摄入量1000kg左右时，ALF的发生率最高。ALF患者中γ-GT值增高者所占的比例较大，AST/ALT比值≤2(85.42％)、碱性磷酸酶(ALP)值增高(＞110U/L)的出现率较高(60.8％)。ALF时患者肝纤维化血清标志物显著升高。 实验二：患者中医证候特点为邪实为主，虚实夹杂；中医病位主要在肝脾，涉及胆胃；ALF中医病机主要为气滞、血瘀、湿热内蕴，兼有正虚。累计摄酒量以及家族酗酒史条件下的累计摄酒量是影响ALF患者中医证候特点分布的重要因素，具有极显著性差异；总胆红素值对ALF患者中医证候特点的分布有极显著性的影响，肝纤维化血清标志物对ALF患者中医证候特点的分布无影响。 实验研究结论：1.酒精性肝纤维化病理改变先后经历轻度酒精性脂肪肝、酒精性脂肪肝、酒精性肝炎和轻度酒精性肝纤维化等病理过程，其主要特点是汇管区和窦周纤维化； 2.酒精性肝纤维化形成过程伴随蛋白、糖、脂类物质代谢障碍、促纤维生成细胞因子过表达等多种病理反应。 3.以益气健脾、活血化痰立法的中药复方调肝理脾方通过阻断多个纤维化病理环节，有效阻断了肝纤维化的进行，在抗酒精性肝纤维化方面显示出良好的治疗效果。

目录

英文缩略语

第一部分理论研究

综述一中医药防治酒精性肝纤维化研究进展

综述二酒精性肝纤维化现代医学研究进展

1酒精性肝病流行病学研究进展

2酒精性肝纤维化发病机制的研究进展

3酒精性肝纤维化的诊断研究进展

4酒精性肝病的治疗进展

5问题及展望

参考文献

综述三酒精性肝纤维化动物模型的研究进展

四导师田德禄教授治疗酒精性肝纤维化的学术思想

第二部分临床研究

实验一酒精性肝纤维化临床资料分布研究

实验二酒精性肝纤维化中医证候特点的研究

第三部分实验研究

实验一实验性酒精性肝纤维化大鼠模型的建立

实验二调肝理脾方抗酒精性肝纤维化机理研究

致谢

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