应用酵母双杂交和酵母三杂交系统研究G蛋白信号传导通路中的相关蛋白因子

摘要

G蛋白是一类由Gα、β、γ三亚基组成的异三聚体蛋白,可介导胞外各种刺激（如：激素、生长因子、物化信息等）向胞内传导,调节细胞生长,分裂、分化等重要生命活动.活化的Gα亚基（Gα-GTP）和Gβγ亚基二聚体可以作为相对独立的结构和功能单位引发不同的信号传导通路.目前,研究这两个功能单位下游的新的效应因子及Gβ和Gγ亚基在Gβγ亚基二聚体胞内信号传导中的作用是研究的热点问题.为了寻找Gβγ下游的新的蛋白因子及研究Gβ或Gγ亚基在Gβγ亚基二聚体中的作用,以揭示G蛋白信号传导的新机制,该研究课题运用酵母双杂交系统和该室构建的酵母三杂交系统,分别以Gβ1和Gβ1γ2为饵蛋白筛选入脑cDNA文库（Gβ1,Gγ2在脑中高表达）,并用免疫共沉淀、细胞免疫荧光共聚焦等技术证实蛋白间的相互作用,另外又用片段删除实验定位蛋白分子间相互识别和结合的特异结构域.结果说明：Gβ1亚基作为独立单位可以与Fascin蛋白结合,参与细胞骨架调控,首次揭示了G蛋白通过Gβ1亚基参与细胞骨架调控的机制;而且发现了Gβ1γ2的新的效应因子,拓宽了Gβγ作为活化因子参与细胞信号调节的范围,并首次报道Gβ1γ2亚基二聚体与蛋白14-3-3的Zeta亚基相互结合形成聚合体而参与多种生命活动调节.同时,该研究还说明Gγ亚基与Gβ亚基结合会改变其构像,从而改变Gβ引发的信号传导通路.另外,成功应用并验证了研究三种蛋白因子间相互作用的酵母三杂交系统.

目录

一、摘要

二、前言

三、材料与方法

五、讨 论

六、小 结

七、参考文献

八、附 录

九、文献综述

附图

十、致 谢

个人简历