细胞因子对垂体人生长激素基因表达的调节及其机理的研究

摘要

该研究以大鼠垂体GH3和MtT/S细胞作为垂体分泌GH的细胞,采用酶免疫分析法和荧光素酶报告基因的方法,从细胞和基因分子水平研究细胞因子(包括IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-11、CNTF、TGF-β、激活素)对垂体细胞中人GH(hGH)基因表达(包括转录水平和翻译水平的表达)的调控作用及其机理.该课题在细胞和基因分子水平上探讨了细胞因子对垂体hGH基因表达的调控及其机制,结果表明,多种细胞因子参与垂体hGH基因表达的调控,而且调控机制可能与GHRH调节GH基因表达的机制不同.这将为阐明GH和免疫系统相互作用,特别是免疫系统对垂体GH的调节作用提供进一步的比较肯定的事实依据.从理论上初步阐明了免疫系统对垂体GH的作用及其机理,使人们对GH在神经—内分泌—免疫网络中的作用有了更深刻、更具体的认识,也为进一步研究GH在应激、感染过程中的作用及地位打下基础.

目录

英文缩写

前言

实验材料

一、细菌和质粒

二、克隆质粒所需的酶类及其他试剂

三、PCR扩增引物和Pit-1反义寡核苷酸

四、细胞系

五、细胞因子、细胞培养及检测试剂

六、细胞信号转导系统的激动剂和抑制剂

七、主要仪器

技术路线和实验方法

一、技术路线

二、构建484-Luc2质粒

三、构建含有不同长度hGH基因调控序列的荧光素酶报告基因质粒

四、质粒的大量制备

五、建立稳定转染的GH3和MtT/S细胞系

六、瞬时转染实验

七、荧光素酶活性的测定

八、β-半乳糖苷酶活性的检测

九、大鼠GH(rGH)浓度的测定

十、细胞因子对大鼠垂体细胞GH分泌和合成的影响

十一、细胞因子对垂体细胞中hGH基因启动子活性的影响

十二、细胞因子影响hGH基因启动子活性可能涉及的细胞内信号转导途径

十三、细胞因子调节hGH基因表达与Pit-1蛋白的关系

十四、不同长度hGH基因启动子的相对转录活性及对细胞因子的反应性

十五、数据处理和统计分析

实验结果

一、484-Luc2质粒的克隆与鉴定

二、含不同长度hGH基因启动子序列质粒的构建和鉴定

三、细胞因子对垂体细胞GH分泌和合成的影响

四、细胞因子对垂体细胞中hGH基因启动子活性的影响

五、细胞因子调节垂体细胞hGH基因启动子活性的胞内信号转导途径

六、细胞因子调节垂体hGH基因启动子活性与Pit-1蛋白的关系

七、不同长度hGH基因启动子的相对转录活性及对细胞因子的反应性

八、本实验所构建质粒测序图

九、本实验结果数据表

讨论

一、稳定转染细胞系的建立

二、垂体细胞中，hGH基因启动子的基础活性及其调节机制

三、IFN-γ等细胞因子对hGH基因表达的调控及其可能的机理

四、TGF-β等细胞因子对hGH基因表达的调控及其可能的机理

六、细胞因子调节垂体GH基因表达的生理及病理意义

小结

结论

参考文献

综述一细胞因子对垂体生长激素分泌的调节及其机制

综述二MAPK信号转导通路及其对炎症反应的调控

博士在读期间发表的文章

致谢