短时和长时U50488H给药对稳定表达κ-阿片受体的HEK 293细胞胞浆钙离子浓度的影响

摘要

目的:以细胞内[Ca<'2+>]<,i>为观测指标,研究κ-阿片受体特异性激动剂U50488H急性及长期作用对κ-HEK细胞内[Ca<'2+>]<,i>的影响,试图阐明其与细胞脱敏、耐受和依赖之间的可能联系.方法:采用Ca<'2+>荧光探针Fluo-3,AM ester和助染剂Pluoronic(R)F-127对κ-HEK 293细胞进行荧光染色,利用激光扫描共聚焦显微成像技术观察细胞内[Ca<'2+>]<,i>的变化情况,存贮Ca<'2+>荧光图像,并作荧光—时间曲线进行统计分析.

目录

摘要

ABSTRACT

英文缩略语

前言

实验材料

一.细胞系

二.试剂及药品

三.主要仪器

四.常用溶液的配制

实验方法

一.细胞培养

二.试剂制备

三.细胞给药

四.细胞染色

五.细胞内[Ca2+]i的测定

六.数据处理

实验结果

一.无药物刺激作用下K-HEK细胞内[Ca2+]i的测定

二.U50488H急性刺激对K-HEK细胞内[Ca2+]i的影响

三.纳洛酮拮抗实验

四.U50488H两次急性刺激对K-HEK细胞内[Ca2+]i 的影响

五.U50488H作用2 h对κ-HEK细胞内[Ca2+]i的影响

六.U50488H作用12 h对κ-HEK细胞内[Ca2+]i的影响

七.U50488H作用24 h对κ-HEK细胞内[Ca2+]i的影响

八.U50488H作用48 h对κ-HEK细胞内[Ca2+]i的影响

九.纳洛酮激发实验

实验讨论

一.阿片受体及其效应体系

二.细胞内Ca2+

三.阿片受体与Ca2+

四.进一步工作

结论

参考文献

综述

参考文献

致谢