人精子膜蛋白YWK-Ⅱ蛋白/APLP2与穆勒氏管抑制性物质（MIS）的相互作用及其信号传导通路的研究

摘要

YWK-Ⅱ蛋白/APLP2是与Alzheimer's病相关的淀粉样蛋白前体(APP)具有高度同源性的一种蛋白,在生精细胞中定位于细胞膜上.其抗体具有精子凝集活性以及抗生育作用.前期研究发现YWK-Ⅱ蛋白/APLP2的胞内段具有与G<,o>蛋白相结合的特征,而胞外段与穆勒氏管抑制性物质(MIS)存在相互作用.穆勒氏管抑制性物质(MIS)是生殖系统中参与性别决定的重要糖蛋白.研究显示,MIS能提高新鲜或冻存的人精子的存活力和活动力.本组提出YWK-Ⅱ蛋白/APLP2可能为MIS在精子表面的新型受体,介导了MIS对人精子的保护作用.本研究希望通过对YWK-Ⅱ蛋白/APLP2和MIS在细胞水平的相互结合及其可能偶联的钙离子信号传导通路的研究进一步证明二者的受体配体关系.本文进一步研究了YWK-Ⅱ蛋白/APLP2与MIS的受体-配体关系,以及偶联的信号传导通路,为阐明MIS对精子保护作用的分子机制奠定了基础,并显示了其潜在的临床应用价值.

目录

前言

实验材料

实验方法

1原核和真核细胞表达质粒的构建

2重组蛋白的表达及纯化

3多克隆抗体的制备效价检测

4细胞的培养和转染

5细胞实验

实验结果

第一部分YWK-II蛋白/APLP2和MIS的相互结合的研究

第二部分MIS和YWK-II蛋白/APLP2的相互作用对钙离子信号通路的研究

第三部分MIS的II型受体胞外端重组质粒的构建

第四部分应用MERCURY PATHWAY PROFILING SYSTEM 研究稳定表达EGFP-YWK-II蛋白/APLP2的CHO细胞系对细胞增殖的影响

讨论

小结

参考文献

附录：英、汉名词对照

GENES EXPRESSED IN SPERMATOGONIA

致谢