L-脯氨酸-间-双（2-氯乙）胺基-L-苯丙氨酰基-L-正缬氨酸乙酯盐酸盐（MF13）的抗肝癌作用及其分子机制的研究

摘要

L-脯氨酸-间-双(2-氯乙)胺基-L-苯丙氨酰基-L-正缬氨酸乙酯盐酸盐(MF13)是一个新颖的含三个肽的氮芥类化合物,分子量为566.MF13在体外对所测定的7株不同来源的人肝癌细胞系均有较强的抗增殖活性,IC<,50>值在0.32~2.32μM之间,IC<,90>值在3.84~29.20μM之间;以人淋巴细胞和正常肝细胞为正常细胞对照的实验结果表明MF13毒性小,对肝癌细胞有较好的选择性.MF13冲击性给药的实验结果显示IC75浓度的MF13与细胞冲击性接触,接触2小时细胞的存活率<50%,8小时细胞的存活率与连续接触72小时的细胞存活率无显著性差异,提示MF13起效快,作用持久.流式细胞仪检测结果显示将Bel-7402或HepG2细胞经MF13处理后主要被阻断在S期,24小时后S期细胞所占的比例超过75%;细胞形态学分析和DNA琼脂糖凝胶电泳结果表明MF13作用后的肝癌细胞出现典型的细胞凋亡特征.裸鼠皮下异种移植人肝癌Bel-7402、HepG2的实验结果表明每七天腹腔注射给药一次,共五次,至实验结束时,与对照组相比,MF132mg、5mg、10mg/kg治疗组对Bel-7402实体瘤的肿瘤生长抑制率分别为44%(p>0.05)、65%(p<0.01)和83%(p<0.01),对HepG2实体瘤的抑瘤率分别为58%(p<0.01)、86%(p<0.001)和94%(p<0.001).对MF13体内作用机制的研究显示MF13不仅能抑制肝癌细胞的生长,而且是通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抗肝癌作用.综上所述,我们得到如下结论:1、MF13体内外均具有明确的抗肝癌活性;2、MF13至少部分是通过pRb蛋白磷酸化将肝癌细胞阻断在S期,从而诱导肝癌细胞凋亡发挥抗肝癌作用;3、MF13抗肝癌作用的分子机制是:不改变Bcl-2的蛋白表达量,而上调Bax蛋白的表达量,使Bcl-2/Bax的比率下降促进肝癌细胞凋亡;MF13可同时激活Caspase-8和Caspase-9两条细胞凋亡信号传导通路,最终经caspase-3途径凋亡;4、体内外实验结果一致表明:同时给药,MF13与MMC联合应用对Bel-7402细胞有协同作用,MF13与VCR联用无协同作用.我们的研究表明肝13是一个有潜在应用前景的抗肝癌化合物.

目录

研究背景

缩略语(Abbreviation)

前 言

一实验材料

二实验方法

三实验结果

1.体外抗瘤活性

2.冲击性给药时的细胞存活率

3.细胞周期分析

4.细胞形态学变化

5.细胞DNA降解断裂

6.MF13诱导的细胞凋亡通路

7.MF13在小鼠体内的毒性评介

8.MF13动物体内抗肿瘤作用的评介

9.对MF13在荷瘤裸鼠体内凋亡诱导作用的研究

10.MF13与其他抗肿瘤药物联全应用的抗肝癌研究

四讨 论

结 论

参考文献

文献综述肝癌发生的分子机理及相关药物研究进展

参考文献

发表或接受的论文和综述及参加的学术会议

致 谢

附件一

附件二

附件三