纤维蛋白胶联合反义寡核苷酸治疗预防移植静脉再狭窄实验研究

摘要

第一部分纤维蛋白胶外支架预防移植静脉再狭窄实验研究 目的：自使用机械方法预防移植静脉再狭窄被提出以来，应用非限制性，生物可吸收材料作为外周支持预防移植静脉再狭窄已经被证实有效，但它们仍有自身缺陷。本实验将纤维蛋白胶作为外周支持，研究其对兔移植静脉内膜和中膜增生的影响。 方法：24只雄性新西兰大耳白兔随机分为非支架组(NS组n=12)和纤维蛋白胶支架组(FS组n=12)。建立兔颈外静脉颈总动脉旁路移植术模型。FS组给予纤维蛋白胶作为外支架。术后28天取出移植静脉，进行组织病理分析和免疫组织化学分析。 结果：与NS组相比，FS组移植静脉内膜和中膜增生程度明显减轻。免疫组化结果显示与NS组相比，FS组移植静脉细胞增殖核抗原表达明显受到抑制；NS组内皮层损伤严重，有淋巴细胞侵润，在FS组内皮层则几乎完好无损；在NS组平滑肌细胞增殖活跃且向内膜迁移，FS组平滑肌细胞增殖受到抑制，且向外膜迁移；在FS组移植静脉外膜有丰富的成熟微小血管网形成，但是在NS组，微小血管数量则非常少。 结论：纤维蛋白胶外支架能给兔移植静脉提供足够的外周支持，显著抑制其内膜和中膜增生程度。该作用与保护血管内皮完整、抑制增殖细胞核抗原表达、促使平滑肌细胞向外膜迁移和形成外膜新生血管网有关。 第二部分纤维蛋白胶外支架提高血管外膜腺病毒转染效率实验研究目的：由于血流冲刷，治疗基因停留时间短，且缺血时间长会加重内膜损伤，经血管腔内途径治疗基因转染抑制移植静脉内膜增生受到限制。经血管外膜转染治疗基因是有效的变通方法，但是受限于低转染效率。在本实验，我们将携带报告基因的腺病毒载体与纤维蛋白胶混合，喷洒在移植静脉外膜，以观察纤维蛋白胶是否能提高血管外膜基因转染效率。 方法：健康纯种新西兰大耳白兔，随机分为两组，每组8只动物：(1)单纯腺病毒对照组；(2)纤维蛋白胶腺病毒组。建立兔颈外静脉颈总动脉旁路移植术模型。对照组移植静脉外周单独给予携带β-半乳糖苷酶报告基因的腺病毒载体，纤维蛋白胶腺病毒组外周给予纤维蛋白胶腺病毒载体混合物。分别于术后第7天和第14天取出移植静脉，评价转染效率。 结果：术后第7天，对照组腺病毒转染效率低下，仅为2.1±0.5％，而纤维蛋白胶腺病毒组表现为高转染效率，为13.2±4.6％，二者比较有高度显著性统计学差异；术后第14天，对照组偶见阳性转染细胞，转染率为0％，而在纤维蛋白胶腺病毒组虽然阳性转染细胞较术后第7天为少，但仍保持高转染率(6.3±3.8％)。 结论：纤维蛋白胶作为一种新的药物缓释系统，能明显提高移植静脉外膜基因转染效率。 第三部分纤维蛋白胶外支架转染PCNA基因反义寡核苷酸预防移植静脉再狭窄实验研究 目的：血管外支架和血管外膜基因治疗均是治疗移植静脉内膜和中膜增生的方法，但是至今没有将二者联合使用预防移植静脉再狭窄的报道。本研究构造携带PCNA基因反义寡核苷酸的腺病毒，将其与纤维蛋白胶混合，经血管外膜途径给药，以期得到二者对预防移植静脉再狭窄有协同作用的直接证据。 方法：24只雄性新西兰大耳白兔随机分为非支架组(NS组n=8)；纤维蛋白胶支架组(FS组n=8)；纤维蛋白胶联合反义PCNA组(AS/FS组n=8)。建立兔颈外静脉颈总动脉旁路移植术模型。FS组给予纤维蛋白胶作为外支架，AS/FS组给予纤维蛋白胶和反义PCNA混合物。术后28天取出移植静脉，进行组织病理分析和免疫组织化学分析。 结果：与NS组和FS组相比，AS/FS组移植静脉内膜和中膜增生厚度明显减少，存在统计学差异。免疫组织化学结果显示，FS组PCNA表达和NS组相比，明显减少；而AS/FS组PCNA表达与FS组相比，同样存在显著差异。 结论：血管外膜反义PCNA转染可进一步抑制移植静脉管壁PCNA表达，纤维蛋白胶外支架联合反义PCNA对移植静脉内膜和中膜增生有协同抑制作用。

目录

英文缩写词表

前言

纤维蛋白胶外支架预防兔移植静脉再狭窄实验研究

材料和方法

实验结果

讨论

结论：

参考文献

附图

纤维蛋白胶外支架提高血管外膜腺病毒转染效率实验研究

材料和方法

实验结果

讨论

结论：

参考文献

附图

纤维蛋白胶外支架转染PCNA基因反义寡核苷酸预防移植静脉再狭窄实验研究

材料和方法

实验结果

讨论

结论：

参考文献

附图

静脉桥内膜增生机制及基因治疗进展（综述）

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