附睾特异蛋白的鉴定研究

摘要

本研究通过建立大鼠实验性左侧精索静脉曲张(ELV)模型模拟人类疾病状态，通过蛋白质组学研究技术，包括双向电泳和质谱分析，以发现并鉴定该病理状态下附睾中特异改变的蛋白成分；同时寻找正常附睾不同区段，附睾头与附睾尾中的差异蛋白成分，以期为临床上男性不育的诊断与治疗发现可能的标志物。另一方面，对于附睾特异蛋白在精子成熟过程中的作用机理开展研究，为开辟新的男性生育调控的附睾途径提供理论依据。 首先，对于建立ELV动物模型的效果加以评价，确定手术效果。并对于使用不同种系的大鼠建立的ELV动物模型进行了比较。结果显示，如果仅从部分结扎后精索内静脉直径的改变而言，SD大鼠较Wistar大鼠具有优势。 本研究中，通过对ELV形成术后不同时间的附睾组织匀浆的PAGE胶电泳分析发现，ELV形成术后4～16周，大鼠附睾尾匀浆液上清中分子量约为22kDa的蛋白含量较假手术大鼠明显增加。并且还发现，该蛋白在附睾的不同区段，附睾头和附睾尾存在含量变化。本研究采用经典的未知蛋白的鉴定路线，对未知目标蛋白纯化，制备出高特异性的抗22kDa抗体，为后续研究提供了有效的工具。 通过双向电泳和质谱分析，然后进行网上数据库的比对，提示22kDa蛋白为磷脂酰乙醇胺结合蛋白(phosphatidylethanolamine-bindingprotein，PBP)。用自制的22kDa抗体和购买的抗RIKP抗体对该蛋白进一步确认。鉴定结果显示，22kDa蛋白为附睾中磷脂酰乙醇胺结合蛋白，并且该蛋白具有糖基修饰，以多个分子的形式存在。通过组织化学对其进行的组织定位研究显示，该蛋白除在睾丸和附睾存在外，在多个组织中广泛分布。 本研究的实验结果显示：PBP在组织中分布广泛，且在附睾中可能以多个修饰蛋白的形式存在；PBP在ELV术后附睾中含量较正常增加，且在正常附睾的不同区段显示含量差异。结合本研究和相关文献，推测附睾合成并分泌特异的PBP，该蛋白可能参与附睾精子成熟过程，确切机制有待进一步研究。

目录

文献综述 附睾分泌蛋白与精子成熟

摘要

前言

主要实验材料及仪器

主要实验方法

实验结果

讨论

小结

参考文献

致谢

个人简历