pig7基因在急性白血病的表达及对白血病细胞增殖活性影响的研究

摘要

目的：检测pig7基因在急性白血病(AL)的表达水平及其临床意义，在基因甲基化调控方而探讨白血病细胞pig7表达异常的可能机制，并通过功能性实验阐释pig7对白血病细胞增殖活性的影响。 方法：应用实时定量逆转录PCR(RT-PCR)，对138例AL患者、21例正常人骨髓标本以及9株白血病细胞系进行pig7转录本的检测。限制性内切酶分析以鉴定白血病细胞中存在的pig7转录剪接体。通过甲基化特异性PCR(MSP)明确白血病细胞系pig7基因启动子区域是否存在过度甲基化。观察依托泊甙(VP16)诱导K562细胞凋亡以及全反式维甲酸(ATRA)诱导NB4细胞分化过程中pig7表达水平的变化。构建含有pig7开放读码框(ORF)的腺病毒表达载体pAd5/F35-pig7，并导入白血病细胞使之瞬时表达pig7基因，研究该基因的生物学功能。 结果：与正常对照相比，AL进展期(包括初治、复发/难治)pig7mRNA水平明显降低(P<0.01)，其中急性髓系白血病(AML)与急性淋巴细胞白血病(ALL)无明显差异，而初治组与复发/难治组pig7 mRNA水平差异显著，前者明显高于后者(P<0.05)。pig7低表达患者完全缓解率也较低(P<0.05)。Bsl I限制性酶切结果提示白轿病细胞中仅存在simple剪接体。在K562和HL60细胞pig7启动子区域存在过度甲基化，而 U937细胞中该区域非甲基化状态占优势。VP16诱导K562细胞凋亡过程中pig7表达无明显变化；NB4细胞经ATRA诱导分化后pig7表达明显增强(P<0.01)。应用AdEasy系统成功构建并包装出Ad5/F35-pig7腺病毒及Ad5/F35-GFP对照腺病毒。体外感染白血病细胞系K562、Raji和HL-60后，在细胞高表达pig7蛋白的同时，增殖率并无明显变化，但联合应用化疗药物VP16作用于K562和Raji细胞后，VP16 IC50值呈降低趋势，MTT比色法和台盼蓝拒染法均检测到细胞增殖受抑(P<0.05)，流式细胞术细胞周期分析显示S期阻滞增强，提示pig7基因产物可增加白血病细胞对VP16的敏感性。 结论：pig7基因在AL存在明显的表达下调并与疗效密切相关。白血病细胞中pig7受累转录本为simple而非litaf，其沉默机制涉及基因启动子区过度甲基化调节。该基因在白血病细胞分化过程中被诱导表达，并可在化疗药物协同下发挥抑制细胞增殖的抗白血病效应。

目录

论文说明：缩略词表

第一部分pig7基因在急性白血病中的表达及临床意义

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分重组腺病毒Ad5/F35-pig7的构建及pig7基因功能的研究

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

综述:pig7基因研究进展

攻读学位期间发表的文章题录

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