力达霉素辅基蛋白对肿瘤组织细胞的结合作用研究

摘要

力达霉素是由一个辅基蛋白质和一个发色团组成的烯二炔类抗肿瘤抗生素，在体外对肿瘤细胞显示出极强的细胞毒作用。其发色团对肿瘤细胞有杀伤作用，而其辅基蛋白有保护和稳定发色团的作用。辅基蛋白对各类肿瘤细胞是否有结合作用，目前尚未见报导。因此本实验研究力达霉素辅基蛋白(LDP)在体外对肿瘤组织细胞是否有结合作用。 本实验第一部分是用异硫氰酸荧光素酯(FITC)对LDP进行标记。将LDP与FITC在碱性条件下反应，产物经葡聚糖凝胶G15过滤和半透膜透析纯化后，并经基质辅助激光解吸电离一飞行时间(MAI.DI-TOF)质谱检测产物，结果显示FTIC与LDP实现偶联(以下称FITC-LDP偶联物)，偶联分子比为1:1。 本实验第二部分是研究FITc-LDP偶联物与肿瘤组织细胞是否有特异性的结合作用。将FITc-LDP偶联物与临床常见的肿瘤组织如肺癌、胃癌、胰腺癌、直肠癌和乳腺癌新鲜冰冻组织标本孵育(37℃，30min)，通过荧光显微镜观察，发现FITC-LDP偶联物与乳腺癌组织细胞有特异性结合。将FITC-LDP偶联物与20例确诊的乳腺癌石蜡标本进行孵育，按荧光强弱程度将染色结果分成阳性、可疑、阴性3级，结果显示FITC-LDP偶联物阳性染色11例，可疑4例，阴性5例。将乳腺癌生物学指标如Her2、ER、P53、Bc1-2、：PCNA、MRP、PR、nm23的免疫组化染色结果同样分成阳性、可疑、阴性3级，来考察FITC-LDP偶联物荧光染色结果与上述免疫组化的染色结果是否存在相关性，结果显示，FITC-LDP偶联物染色结果与ER、P53和Bc1-2染色结果分别经Kappa一致性检验，均有统计学意义(P<0.05)。FITC-LDP偶联物荧光染色结果与ER、P53和Bc1-2免疫组化染色结果，经Spearman等级相关性检验，分别呈负相关(P<0.05)、正相关(PO.05)。FITC-LDP偶联物荧光染色结果与其它生物学指标如Her2、PCNA、MRP、PR、nm23的免疫组化染色结果均无一致性和等级相关性(P>0.05)。 综上所述，本文的试验结果提示L,DP可能对乳腺癌细胞存在特异的结合作用，这种结合作用可能与乳腺癌组织上的ER和P53存在相关性。

目录

论文说明：缩略语一览表

前言

材料与方法

实验材料

实验方法

1.FITC与LDP的偶联

2.FITC-LDP偶联物对临床常见癌组织冰冻标本结合作用筛选

3.FITC-LDP偶联物对乳腺癌石蜡标本结合作用

4.FITC-LDP偶联物和乳腺癌生物学指标相关性判定

结果

1.FITC分别与LDP偶联结果

2.肿瘤新鲜组织冰冻标本靶向性筛选结果

3.乳腺癌病理组织石蜡标本荧光和免疫组化染色实验结果

4.FITC-LDP偶联物染色与Her2、ER、PR、MRP、Bcl-2、nm23、PCNA、P53染色相关性研究

讨论

1.LDP荧光衍生化思路

2.FITC-LDP偶联物荧光染色及定位

3.乳腺癌标本石蜡标本FITC-LDP偶联物、Her2、ER、PR、MRP、Bcl-2、nm23、PCNA、P53染色相关性分析

附图和附表（一）

附图和附表（二）

参考文献

综述：蛋白质荧光标记技术应用综述

致谢