希罗达临床应用相关研究：胸腺嘧啶磷酸化酶（TP酶）、二氢嘧啶脱氢酶（DPD酶）在乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织中的表达水平；血浆、乳腺癌组织及癌旁正常乳腺组织中希罗达/5-Fu浓度测定；中国汉族乳腺癌患者DPYD基因多态性研究

摘要

【背景和目的】 5-Fu首先合成于40余年前<'[1]>，一直应用于乳腺癌、卵巢癌等<'[2]>，其常规剂量为1500mg/m<'2><'[3]>。静脉推注5-Fu会出现各种不良反应<'[4-7][15][18][21][22]>，发生机理已被阐明<'[8]>。希罗达(卡培他滨)为5-Fu的氨基甲酸酯形式，利用生物酶的独特分布高度选择性<'[9-12]>杀伤肿瘤细胞<'[15-17]>。希罗达进入体内后通过三步酶联反应转化为5-Fu(见图1)。DPD酶为5-Fu代谢途径的限速酶<'[18-20]>，体内80％以上<'[1][13][14]>5-Fu经其代谢(见图2)。个体间DPD酶的活性差异很大<'[18][13-25]>。DPD酶由DPYD基因编码<'[27][28]>，DPYD碱基突变与不良反应相关<'[26]>。 【研究对象与方法】 分为三部分：采用ELISA方法测定TP酶/DPD酶活性；利用HPLC技术检测患者血液中、乳腺癌组织中以及癌旁正常乳腺组织中的5-Fu和卡培他滨的浓度；最后利用分子生物学技术对DPYD基因进行测序分析。 【结果】 1．TP酶在乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织中表达水平具有统计学差异；DPD酶不具有统计学差异。 2．5-Fu及Capecitabine在乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织中浓度分布规律不明显。 3．DPYD*5的A1627G突变位点的分析结果为：7G，31R，45A，11N；DPYD*9的T85C突变位点的分析结果为：74T，18Y，1N，1C。 【结论】 ER、PR与发生不良反应相关。TP酶在乳腺癌组织中高表达，在癌旁正常乳腺组织中低表达，希罗达对TP酶在组织中的含量没有显著影响；DPD酶的高低可以指导患者的临床用药。在P=0.10的水平上5-Fu浓度分布具有统计学差异。 Capecitabine不具有。DPYD与个体间药物浓度及发生不良反应相关，但需进一步深入研究。

目录

论文说明:缩略语表

第一部分：乳腺癌组织和癌旁正常乳腺癌组织中胸腺嘧啶磷酸化酶(TP酶)和二氢嘧啶脱氢酶(DPD酶)浓度测定

标本采集与制备

总蛋白浓度测定

一 建立总蛋白浓度定量分析方法

二 乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织中总蛋白浓度测定结果

胸腺嘧啶磷酸化酶(TP酶)表达量的分析测定

一建立胸腺嘧啶磷酸化酶(TP酶)定量分析方法

二 乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织中TP酶浓度测定结果

二氢嘧啶脱氢酶(DPD酶)表达量的分析测定

一 建立二氢嘧啶脱氢酶(DPD酶)定量分析方法

二 乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织中DPD酶浓度测定结果

第二部分：应用高效液相色谱测定5-Fu和卡培他摈在血浆、乳腺癌组织及癌旁组织中含量

5-Fu在血浆、乳腺癌组织及癌旁组织中定量分析

一 建立5-Fu HPLC定量分析方法

二 HPLC法测定5-Fu结果

立体选择性高效液相色谱法测定人血浆中/乳腺癌组织中/癌旁正常乳腺组织中卡培他滨浓度

一 建立Capecitabine HPLC定量分析方法

二 HPLC法测定Capecitabine结果

第三部分 96名中国汉族乳腺癌患者DPYD基因多态性分析

一、建立二氢嘧啶脱氢酶(DPD酶)编码基因DPYD测序方法

二、二氢嘧啶脱氢酶(DPD酶)编码基因DPYD测序结果

讨论

男性乳腺癌高危因素

致谢