解整合素-金属蛋白酶12作为产前筛查标志物的初步研究

摘要

研究目的：(1)利用时间分辨法检测早孕期母体血清ADAM12-S水平，初步评价ADAM12在早孕期产前筛查应用价值。 (2)利用基因合成技术，合成全长ADAM12-S蛋白，为建立以全长ADAM12为抗原的检测试剂盒做基础。 研究方法 (1)选取2007年7月至2008年1月就诊于北京协和医院的早孕期(6-13+6周)孕妇，留取其血清，应用时间分辨法检测ADAM12-S水平；通过不同途径获得胎儿细胞进行培养并行染色体核型分析；分析不同妊娠结局与ADAM12水平的关系。 (2)应用采用Oligo基因合成方法合成全长ADAM12核酸序列并测序；应用原核载体质粒PET-30a构建ADAM12-S载体质粒，连接转化入大肠杆菌(BL21)进行蛋白表达；用westernblot、质谱分析、特异性抗体检测进行蛋白鉴定。 结果 1.孕妇518例，血清标本664例。其中分娩年龄≥35岁者138名，占25.5％。双胎7例。 2.(1)518例孕妇中早孕期丢失者32例(胚胎停育27例、异位妊娠4例、瘢痕妊娠1例)，中晚孕有2例因胎儿异常行中孕引产，早产14例，子痫前期2例，FGR2例，妊娠期糖尿病22例，前置胎盘5例(2)发现染色体异常13例，其中21-三体3例。 3.孕6-13周ADAM12的MoM值分别为14.63ng/ml，35.08ng/ml，88.9ng/ml，186.51ng/ml，370.62ng/ml，537.71ng/ml，632.55ng/ml，769.42ng/ml。血清ADAM12水平随孕周逐渐上升，且呈线性相关，r=0.992(P＜0.01)。 4.非整倍体染色体异常、胚胎停育的平均MoM值分别为0.34、0.24，与正常妊娠(1.008)相比，差异有统计学意义，P＜0.05。 5.非整倍体常染色体异常早孕期母体血清ADAM12水平的平均MOM值为0.29，较正常妊娠呈下降状态，P＜0.05。3例DS早孕期母体血清ADAM12水平的MOM值分别为1.48、0.39、0.23，拟合对数曲线，MOM值随孕周呈上升趋势6.早孕期母体血清ADAM12水平与胎儿体重相关性不明显，r=-0.15(P＜.05)。 7.前置胎盘早孕期母体血清ADAM12水平的平均MOM值为1.45，与正常妊娠比较，差异有统计学意义，P＜0.05。妊娠糖尿病、早产的平均MOM值(1.03，0.73)与正常妊娠比较，差异无统计学意义，P＞0.05。 8.合成全长ADAM12核酸序列经测序符合目的序列，表达蛋白分子量及质谱分析蛋白符合目的蛋白。 9.构建ADAM12-S载体质粒。 10.用特异性ADAM12抗体检测合成蛋白，但含量较低。 结论 1.早孕期母体血清ADAM12水平随孕周逐步上升。 2.早孕期母体血清ADAM12水平可用于非整倍体常染色体异常的筛查。 3.早孕期母体血清ADAM12水平可以预测胚胎停育、异位妊娠等早期妊娠丢失。 4.前置胎盘患者早孕期母体血清ADAM12水平有升高的趋势。 5.早孕期母体血清ADAM12水平与胎儿体重、与妊娠期糖尿病、早产相关性不明显。 6.ADAM12可作为产前筛查指标，但建议在孕9-12周应用。 7.采用Oligo基因合成方法核酸，可获得全长ADAM12-S核酸序列。 8.成功构建PET-30a-ADAM12-S质粒载体，并顺利转化至Ecol.细胞。 9.大肠杆菌表达系统可大量表达全长ADAM12-S，但可能影响ADAM12-S的修饰，与天然蛋白有差异。 10.更换表达系统如酵母表达系统是今后的选择。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语表

前 言

第一部分早孕期母体血清解整合素-金属蛋白酶12水平与妊娠结局关系的初步研究

前言

资料与方法

结果

讨论

小结

第二部分合成全长ADAM12-S蛋白的初步研究

前言

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

综述 解整合素-金属蛋白酶12在产前筛查方面的应用

致谢