特殊皮肤疣中人乳头瘤病毒感染状况的临床特征和基因分型研究

摘要

疣是人乳头瘤病毒(HPV)感染所致常见的皮肤科疾病之一，在临床工作中，常遇到如下困惑：发生在指(趾)间、腋下、腹股沟或口腔内形态酷似尖锐湿疣的皮疹如何诊断？发生在肛门、外生殖器的类似寻常疣且数年无变化的皮疹是否也诊断为尖锐湿疣？其HPV型别与寻常疣相同还是与尖锐湿疣相同？非生殖器部位皮损是否存在高危型HPV感染的可能？继发肿瘤的机会有多大？本研究拟通过了解此类“特殊皮肤疣”的形态、病理、HPV型别之间的相互关系，旨在回答临床工作中遇到的问题，寻找其分子生物学、临床治疗学和流行病学资料，为这组“特殊皮肤疣”诊治提供相应的理论基础，为预后提供一定的指导作用，并为进一步的深入研究奠定基础。全文具体分为三部分。 第一部分、“特殊皮肤疣”中人乳头瘤病毒的基因分型研究。 目的：探讨特殊部位(趾间，腹股沟)皮肤疣、特殊形态(鸡冠状、菜花状)头面部疣和特殊形态(乳头状、丘疹状)生殖器疣等四组特殊皮肤疣的HPV基因型别分布。 方法：通过直接测序法对“特殊皮肤疣”中的HPV进行基因分型研究。根据测序所得到的型别，结合文献中皮肤疣的常见型别，分别设计型特异引物，通过型特异性PCR来验证和补充测序结果。 结果： (1)趾间组20例、腹股沟组29例，HPV型别以HPV7为主；头面部组30例HPV型别以HPV27、7为主；生殖器组18例HPV型别以HPV6、11为主，未检测到HPV7；HPV2、7、27、57是寻常疣组中HPV主要的型别，腹股沟组和生殖器组均出现高危型(HPV16)。与寻常疣对照组相比，趾间组、腹股沟组和生殖器组HPV7构成比差异有显著统计学意义(P值分别为0.000、0.000和0.011)；而头面部组HPV7构成比差异无统计学意义(P=0.413)。 (2)7对TSP-PCR的结果表明，在趾间、腹股沟、生殖器组均存在多种型别的混合感染。两种方法的型别符合率较高(80～99％)。 结论：趾间、腹股沟等皮肤皱褶处疣中HPV7的感染性较高，皮疹形态以菜花状、丘疹状为主。头面部菜花状疣HPV型别以HPV27、7为主，生殖器丘疹状疣HPV型别以HPV6、11为主，腹股沟疣和生殖器丘疹状疣中存在高危型HPV(HPV16)。各组均存在HPV混合型别感染。 第二部分、特殊皮肤疣的临床病理特征研究。 目的：探讨“特殊皮肤疣”的临床和病理特征及各观察组的HPV基因型别与主要的临床病理特征之间的相关性。 方法：对趾间疣、腹股沟疣、头面部疣和生殖器疣四组“特殊”皮肤疣的临床和病理特征进行归纳和总结，对各观察组的HPV基因型别与主要的临床病理特征之间的相关性进行统计学分析。 结果：趾间组、腹股沟组患者均为男性，形态以菜花状、丘疹状为主，与寻常疣组形态相比，差异有统计学意义(菜花状P=0.011，丘疹状P=0.005)。疣体形态与HPV型别之间没有显著的关联性。共有56例患者的皮损作普通病理，表现寻常疣模式者18例，尖锐湿疣模式者16例，不易鉴别者22例。HPV7阳性(18份)的病理象特征：(1)乳头瘤样增生和棘层肥厚；(2)内含中等大小的透明角质颗粒的细胞深染；(3)显著的角化过度和角化不全。 结论：HPV型别与疣体形态之间的相关性无显著的统计学意义。特殊皮肤疣病理可表现为典型的寻常疣病理像或尖锐湿疣病理像，HPV7阳性的病理像具有特征性组织学改变。结合特殊皮肤疣中HPV型别分布，建议特殊部位(趾间，腹股沟)皮肤疣、特殊形态(鸡冠状、菜花状)头面部疣诊断为寻常疣；特殊形态(乳头状、丘疹状)生殖器疣诊断为尖锐湿疣。 第三部分、PCR产物的TA克隆及趾间皮屑HPV DNA的检测。 目的：对趾间疣组中的基因型进行进一步验证，初步探索HPV7在趾间疣中的寄居或致病状态。 方法：采用PCR产物的TA克隆法对趾间疣组中的基因型进行进一步验证，设计趾间疣的病变阴性对照，取足癣患者和健康人群的趾间皮屑筛查有无HPV及HPV7的寄居。 结果：取趾间疣组12份DNA标本，TA克隆其通用引物PCR产物，每一份标本的4个TA克隆子中至少有1个成功合成质粒重组体，其测序所得序列与直接测序法所得的序列序均有90％以上的一致性。共采集趾间糜烂型足癣患者皮损处皮屑53例作为阴性对照和健康人群趾间皮屑48例作为空白对照，HPV的阳性率分别为(15.09％，8/53；16.67％，8/48)，未检测到HPV7 DNA。 结论：测序型别可能是趾间疣的致病的HPV型别，趾间疣中所检测到的HPV7，可能处于致病状态，HPV7可感染免疫力正常的人群。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语

声明

1.引言

2.实验材料

2.1组织材料

2.2实验仪器与器皿

2.3生物及生物化学试剂

2.4其它化学试剂

3实验目的、方法、结果与讨论

3.1第一部分“特殊皮肤疣”中人乳头瘤病毒的基因分型研究

3.1.1实验目的

3.1.2对象和方法

3.1.3结果

3.1.4讨论

参考文献

3.2第二部分 特殊皮肤疣的临床病理特征研究

3.2.1实验目的

3.2.2对象与方法

3.2.3结果

3.2.4讨论

参考文献

3.3第三部分PCR产物的TA克隆及趾间皮屑HPVDNA的检测

3.3.1 PCR产物的TA克隆

3.3.2趾间皮屑HPVDNA的检测

参考文献

4.全文小结

论文相关综述:HPV7与疣

论文相关论著:HPV7 相关趾间疣合并肛周疣1例

研究生期间已发表文章一览

致谢