喉鳞癌及癌旁正常组织中microRNA的差异表达分析

摘要

目的：喉癌的早期诊断及喉鳞癌复发的早期判断对喉鳞癌的治疗至关重要，而目前人们对于相关的分子机理及分子标志的认识还很有限。本研究应用基因芯片技术，研究喉鳞状细胞癌的microRNA(miRNA)表达谱，筛选喉鳞癌和癌旁正常中组织差异表达的miRNA，为深入理解喉鳞癌发生发展的分子机理，寻找鉴定相应的分子生物学指标志奠定基础。
　　 方法：选取8例手术切除新鲜冻存的喉鳞癌及其配对的癌旁正常组织，Trizol法提取总RNA，使用Agilent 2100生物分析仪鉴定总RNA的质量；获得了符合基因芯片杂交质控要求的RNA样品。使用Agilent荧光标记与杂交试剂盒(P/N:5190-0456)，样品经Cy3荧光标记后与含有容纳723条人类miRNA探针的基因芯片(Agilent Human miRNA Microarray version 2Kit，P/N G4470B)进行杂交。杂交后洗涤过的芯片以Agilent芯片激光扫描仪进行扫描，Feature Extraction软件提取数据，采用GeneSpring软件分析数据，以t检验筛选在喉鳞癌和癌旁正常组织中差异表达的miRNA(以p值<0.05和FC值>2为条件)，并用TargetScans、Pictar、Miranda、Mirtarget2等软件对其可能的靶基因进行预测。
　　 结果:共有132个miRNA在8例喉鳞癌中均有表达。喉鳞癌和癌旁正常组织中差异表达的miRNA有53个，其中22个在喉鳞癌中出现上调，31个出现下调；差异表达5倍以上的miRNA共有8个，分别为miR-196b、m1R-196a、miR-375、nuR-139-5p、miR-7、miR-338-3p、miR-183和miR-370，其中m1R-196b、miR-196a和miR-375差异表达8倍以上。
　　 结论:基因芯片技术是一种有效的高通量分析喉鳞癌相关miRNA表达谱的检测方法。通过初步的miRNA芯片分析，发现了53个在喉鳞癌中异常表达的miRNA，其中明显差异表达的miRNA有8个，这些miRNA有可能成为新的喉鳞癌特征性分子生物学标志物。生物信息学分析软件预测差异表达的miRNA可能的靶基因，则为进一步研究认识喉鳞癌发病发展的分子生物学机制，寻找鉴定临床诊治相关的分子标志物奠定基础。

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论文综述：microRNA与头颈部肿瘤的研究进展

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