肿瘤细胞叶酸受体表达上调及其对叶酸偶联物摄取的影响

摘要

目前，利用叶酸进行靶向治疗或靶向成像的研究主要依赖于靶细胞表面表达足够水平的叶酸受体（FR）。事实上，在成功应用FR介导靶向治疗的试验动物模型中，肿瘤组织都表达最佳水平且均一的叶酸受体；对于人体肿瘤叶酸受体表达的结果显示，叶酸受体在不同细胞中的表达存在较大差并且表达不均一。有关调节叶酸受体表达的研究显示：转录调节剂如全反式维甲酸、地塞米松（Dex）等可以选择性上调叶酸受体阳性肿瘤细胞中FR的表达，受体调节剂无论单独使用或与组蛋白脱乙酰化酶抑制剂联合使用时，均可以在调节FR表达方面发挥效应。
　　 本研究选择地塞米松作为受体调节剂上调肿瘤细胞的FR-α表达；同时考察当细胞表面FR-α表达上调后对细胞叶摄取酸偶联载药胶束的影响。
　　 1.地塞米松上调肿瘤细胞FR-α表达
　　 通过RT-PCR和Western Blot方法鉴定了三种肿瘤细胞FR-α表达情况，结果显示：MCF-7为叶酸受体阴性肿瘤细胞；HeLa和SKOV-3为叶酸受体阳性肿瘤细胞。选择HeLa和SKOV-3作为考察受体调节和靶向摄取的实验细胞，经WST-1方法检测，结果显示：Dex使用剂量在5-100 nM范围内对实验细胞增殖几乎无影响。利用定量PCR和流式细胞仪分别检测Dex对FOLRI基因表达的及细胞表面FR-α表达的上调作用。实验结果显示：Dex剂量在5-100 nM范围对SKOV-3细胞中FOLRI基因表达上调近2倍，但对细胞表面蛋白FR-α的表达无明显调节作用；相同剂量范围Dex对HeLa细胞中FOLRI基因表达上调超过2倍，同时细胞表面FR-α表达升高超过1倍。
　　 2.FR-α上调后肿瘤细胞对叶酸靶向的影响
　　 用荧光显微镜和流式细胞仪考察Heta细胞摄取叶酸偶联胶束（FM）和普通胶束（M）的差异。结果显示：HeLa细胞对FM摄取量高于M；且细胞对FM的摄取可以被1 mM游离叶酸抑制。表明FR参与了HeLa细胞对FM的摄取过程。同时比较调节FR-α表达前后对细胞摄取FM的影响：使用100 nM地塞米松预处理HeLa细胞96h，流式细胞仪检测发现细胞表面FR-α的表达升高近一倍；且受体表达未调节实验组相比，当细胞表面受体表达升高后HeLa细胞对FM的摄取量也得到增加。

目录

文摘

英文文摘

第一章 绪论

1.叶酸受体在正常组织和肿瘤组织中的分布

2.叶酸受体在肿瘤靶向治疗中的应用

3.叶酸受体表达水平的调节

4.课题的提出与研究内容

参考文献

第二章 叶酸受体表达的检测

1.前言

2.材料与仪器

3.实验方法

4.结果与讨论

5.小结

参考文献

第三章 地塞米松对叶酸受体表达的调节作用

1.前言

2.材料与仪器

3.实验方法

4.实验结果及讨论

5.小结

参考文献

第四章 叶酸受体表达水平对叶酸偶联胶束摄取的影响

1.前言

2.材料与仪器

3.实验方法

4.实验结果与讨论

5.小结

参考文献

全 文 总 结

论文发表及成果

致 谢