骨髓间充质干细胞对自然衰老小鼠T细胞的调节作用研究

摘要

目的：研究自然衰老小鼠与年轻小鼠脾组织中CD8+CD28+T细胞和CD4+CD25+T细胞培养48小时后比例的差异。进一步研究探索:(1)小鼠骨髓间充质干细胞对自然衰老小鼠CD8+CD28+T细胞、CD4+CD25+T细胞的影响作用,从而证明骨髓间充质干细胞对小鼠T细胞衰老的调节作用。(2)小鼠骨髓间充质干细胞对自然衰老小鼠CD8+CD28+T细胞的调节作用是否具有剂量依赖性,为下一步研究机制提供实验基础。
　　 方法：第一部分:C57BL/6N小鼠12—14月龄和6—8周龄各五只,分别分成年老组和年轻组。用小鼠淋巴细胞分离液将这些小鼠脾细胞中的淋巴细胞分离计数,每只小鼠的淋巴细胞分成两份,在细胞培养箱里用含有10％特级胎牛血清的RPMI1640培养基培养,48小时后用荧光抗体PE—anti—mouse CD8、FITC—anti—mouse CD28,PE—anti—mouse CD25、FITC—anti-mouse CD4分别标记这些细胞,最后用流式细胞仪检测CD8+CD28+T细胞、CD4+CD25+T细胞在年老组和年轻组的比例差异。第二部分:将从赛业(广州)公司购买的取自6—8周小鼠的骨髓间充质干细胞从第六代扩增到第八代,胰酶消化后计数备用。首先检测年老小鼠CD8+CD28+T细胞经过与骨髓间充质干细胞共培养后的比例变化情况,同时研究这种改变是否有剂量依赖性,此作为实验一。实验一分为三组:隔离共培养组:骨髓间充质干细胞与淋巴细胞以1:1、1:2、2:1比例放入Transwell系统,骨髓间充质干细胞放在底下,而淋巴细胞放在小室里,每个比例的淋巴细胞取自不同的五只小鼠,加入淋巴细胞完全培养基共培养。混合共培养组:骨髓间充质干细胞与五只不同小鼠的淋巴细胞以l:1比例放入6孔板的小室内,同时加入淋巴细胞完全培养基共培养。对照组:五只不同小鼠的淋巴细胞放入培养皿加入淋巴细胞完全培养基培养。48小时后加入PE-anti-mouse CD8、FITC—anti—mouse CD28抗体,上流式细胞仪进行检测。检测衰老小鼠CD4+CD25+T细胞经过与骨髓间充质干细胞共培养后的比例变化情况,此作为实验二,实验二分为两个组,共培养组:骨髓间充质干细胞与淋巴细胞以1:1比例放入Transwell系统,每个比例的淋巴细胞取自不同的五只小鼠,加入淋巴细胞完全培养基共培养。对照组:五只不同小鼠的淋巴细胞放入培养皿加入淋巴细胞完全培养基培养。培养48小时后加入PE—anti—mouse CD25、FITC—anti-mouse CD4抗体,上流式细胞仪进行检测。数据用SPSS13.0统计软件分析,p(0.05有统计学意义。
　　 结果：(1)经过淋巴细胞分离液分离,年老鼠组中淋巴细胞数量高于年轻鼠淋巴细胞数量。(2)单纯培养48小时后T细胞CD8+CD28+的共表达率年老组低于年轻组；但T细胞的CD4+CD25+的共表达率年老组却高于年轻组。(3)实验一隔离共培养组中的CD8+CD28+T细胞比例与对照组相比有显著提高,并且骨髓间充质干细胞提高T细胞表面CD8+CD28+的共表达具有剂量依赖性。混合共培养组的CD8+CD28+T细胞比例与对照组相比升高,而与隔离共培养组相比降低。(4)实验二中共培养组的CD4+CD25+T细胞的表达率低于对照组,有统计学差异。
　　 结论：
　　 (1)单纯培养48小时后T细胞CD8+CD28+的共表达率年老鼠组低于年轻组；但是年老鼠组的CD4+CD25+的共表达率却高于年轻鼠组。
　　 (2)骨髓间充质干细胞可以使衰老T细胞变的倾向于“年轻”状态,平衡原理可能起到了至关重要的作用。