纳米乳剂与天冬等5种中草药提取物对流感灭活疫苗的佐剂效应研究

摘要

流行性感冒简称流感,是由流感病毒引起的急性呼吸道传染性疾病。流感发病快,传染性强,发病率高。目前防止流感最有效的手段依旧是接种流感疫苗。在流感爆发期间,适当及时的疫苗接种可明显减少流感发病率和死亡率。但由于当前流感疫苗生产工艺的限制,一旦大流行流感爆发,不可能在短时间内向接种人群提供足量的疫苗。在流感疫苗中使用佐剂不仅可以增强疫苗抗原免疫原性,还可以降低抗原用量。特别在应对大流行流感时,使用佐剂节约抗原用量进而使更多的人群在爆发期间能够及时接种疫苗显得尤为重要。
　　 乳剂作为疫苗佐剂已经具有一定的应用,纳米乳剂是粒径小于100nm的乳剂,是由水相、油相、表面活性剂和助表面活性剂形成的稳定体系。其中连续相为油相、分散相为水相的纳米乳剂为W/O型。本研究选用实验室已有配方中安全性和质量比最优化体系组合,即表面活性剂(TW-80)、助表面活性剂(1,2-丙二醇)、油相(IPM)体系。采用水相滴定法,将流感疫苗水溶液作为纳米乳剂成分中的水相,制备成W/O型纳米乳剂流感疫苗,考察了W/O型纳米乳剂的佐剂效应。
　　 我国中草药资源丰富,众多研究已经证明很多中草药具有调节机体免疫力、增强免疫反应的功能。中草药是一种值得开发和利用的优势资源,有希望开发成为一类新型疫苗佐剂。本研究对天冬提取物及其他几种中草药提取物的免疫佐剂效果做了进一步研究。并且在实验室前期初步实验证明天冬提取物具有免疫佐剂效应基础上,应用二次回归正交旋转组合方法以天冬提取物及流感疫苗HA含量作为2个关键因素设计分组,将HI效价作为响应值,使用SAS V9.1软件进行数据分析,对天冬提取物及疫苗剂量组合进行研究与优化,并得出最佳响应值对应的二者剂量。
　　 将以上制备的不同佐剂型流感疫苗与H3N2流感灭活疫苗共同肌肉免疫小鼠,以灭活疫苗的单独免疫组、灭活疫苗与氢氧化铝共同免疫组、生理盐水免疫组作为对照组,于0d、21d进行免疫,取尾血收集血清,测定HI抗体效价检测及IgG抗体及亚类含量检测。并以HI效价作为响应值,使用SAS V9.1软件进行数据分析,对天冬提取物及疫苗剂量组合进行研究,并得出最佳响应值对应的二者剂量。并对纳米乳剂组、天冬提取物组及对照组小鼠处死前2周进行第3次免疫,实验结束时进行解剖,取脾脏做淋巴细胞在体外的细胞增殖反应。并取纳米乳剂组小鼠心、肝、肺、肾、脑做了病理切片研究；对初次进行佐剂效果研究的中草药组别的小鼠增长体重进行了检测,初步考察对小鼠机体的安全性。
　　 研究显示,纳米乳剂及部分中草药提取物都不同程度的显示出较好的佐剂效果；纳米乳剂组小鼠主要脏器检查未见明显异常,初次佐剂效果研究实验组小鼠体重增长不受影响；并得出天冬提取物佐剂流感疫苗优化剂量HA含量为4.345μg、天冬提取物含量为0.1mg时,能够获得最高响应值HI效价为5092。