白藜芦醇对Pristane诱导儿狼疮鼠B淋巴细胞作用及其机制研究

摘要

研究背景:
　　 系统性红斑狼疮是典型的自身免疫性疾病，以T、B细胞的高反应性、自身抗体的出现、免疫复合物的沉积和多系统器官组织的损害为特征，目前尚无完全令人满意的治疗SLE的药物。以往认为T淋巴细胞异常活化为SLE的主要发病机制，而今B淋巴细胞在SLE中的地位变得越来越重要。基因敲除鼠Sirt1-/-能出现系统性红斑狼疮样表现，提示SIRT1有望成为SLE预防和治疗的靶点。而白藜芦醇(Resveratrol，Resv)为SIRT1的激动剂，且具有调节免疫反应的作用。本课题组的前期研究结果显示，Resv对Pristane诱导小鼠发生狼疮具有预防作用，并能抑制狼疮鼠脾脏CD4+T淋巴细胞的活化、增殖、诱导其凋亡。而目前尚无Resv对SLE及狼疮模型B淋巴细胞作用的相关报道。
　　 研究目的:
　　 体内观察Resv对狼疮鼠模型B淋巴细胞的影响;体外研究Resv对狼疮鼠B淋巴细胞活化、增殖、凋亡、分化和功能的影响，并探讨其可能机制，为Resv应用于治疗SLE的前景提供新的依据。
　　 方法:
　　 1.将BALB/e鼠随机分成正常对照组、模型对照组、Resv组三组，每组10只，观察期为7月。应用ELISA法检测血清Ig各亚型和自身抗体，免疫荧光法检测免疫球蛋白IgG、IgM的沉积。
　　 2.分离Pristane诱导狼疮鼠脾脏单个核细胞(SMC)，磁珠分选法分离CD19+B淋巴细胞，SMC或B细胞用不同浓度Resv干预后，用流式细胞术分析其CD69、CD80、CD86的表达;B细胞CFSE染色后用不同浓度Resv干预后，流式细胞术分析其增殖情况;B细胞用不同浓度Resv干预后，流式细胞术分析细胞凋亡;SMC或B细胞用不同浓度Resv干预后，用流式细胞术分析其分化情况，应用Real-time PCR检测Blimp-1基因mRNA的表达;SMC或B细胞用不同浓度Resv干预后，应用ELISA检测培养上清中的Ig各亚型的相对浓度，应用CBA法检测上清中细胞因子水平。
　　 结果:
　　 1.正常对照组与Resv组IgG在肾脏的沉积均明显弱于模型对照组;正常对照组IgM的沉积明显低于模型对照组，Resv组IgM的沉积存在减弱的趋势;正常对照组血清IgG1、IgG2a、IgG3、IgM、IgA明显低于模型对照组;Resv组血清IgG1、IgG2a、IgG3明显低于模型对照组;正常对照组血清ANA、抗ds-DNA抗体、抗ss-DNA抗体明显低于模型对照组;抗nRNP/Sm抗体模型对照组与正常对照组相比存在升高的趋势;Resv组血清ANA、抗ds-DNA抗体、抗RNP/Sm抗体虽比模型对照组下降，但并无统计学意义。
　　 2.Resv体外可抑制由LPS或抗CD40抗体引起的B细胞CD69、CD80、CD86的表达，且呈剂量依赖性;Resv可抑制由LPS引起的B细胞的增殖，且呈剂量依赖性;而Resv对B细胞的凋亡无影响;Resv可抑制由LPS或抗CD40抗体引起的SMC或B细胞CD138+浆细胞的分化，且呈剂量依赖性;Resv可使B细胞Blimp-1 mRNA表达水平显著下降;Resv可抑制B细胞的IgG1、IgG2a、IgG3、IgM、IgA的分泌，且呈现剂量依赖性;Resvl0μM能促进B细胞IL-10的分泌;而Resv40μM抑制IL-10的分泌;Resv可抑制IL-6的分泌;Resv可使培养上清的IFN-γ/IL-4比例显著下降。
　　 结论:
　　 pristane诱导狼疮鼠存在B淋巴细胞的高反应性;白藜芦醇体内体外均可调控B淋巴细胞的功能;白藜芦醇体内可抑制pristane诱导狼疮鼠B淋巴细胞的高反应性，减少免疫球蛋白IgG1、IgG2a、IgG3的分泌，减少免疫复合物在肾脏组织的沉积;白藜芦醇体外可抑制pristane诱导狼疮鼠B淋巴细胞的活化和增殖，抑制其分化为浆细胞，抑制Blimp-1 mRNA的表达，抑制其免疫球蛋白的分泌，调节其细胞因子的分泌。因此，白藜芦醇可能为潜在的治疗SLE的药物。

目录

声明

英文缩略词

摘要

前言

第一部分 白藜芦醇对狼疮鼠B淋巴细胞影响的体内研究

背景

材料与方法

结果

讨论

小结

第二部分 白藜芦醇对狼疮鼠B淋巴细胞作用的体外研究

背景

材料和方法

结果

讨论

小结

全文总结

参考文献

综述 B淋巴细胞与系统性红斑狼疮研究进展

附录一 SLE诊断标准(ACR1997)

附录二 个人简历

致谢