宫颈癌不同病程组织中HPV16型E2、E6、E7基因的相关研究

摘要

本研究选取了HPV16型感染的宫颈癌病例样本（部分含癌旁组织），对E6、E7基因进行测序分析，分别构建进化树，用实时定量PCR的方法检测DNA水平上E2/E6值以判断病毒基因组的存在状态及E2、E6、E7 mRNA水平，并分析E6 mRNA的剪接情况，研究结果如下: 1.E6和E7的建进化树结果显示只有亚洲变异型和欧洲变异型没有发现非洲1型、非洲2型、亚-美型和北美变异型。检测到T178G-A647G-T846C共突变，其与宫颈癌临床分期没有相关性(x2=0.046，P＞0.05)。 2.对73例HPV16型病毒感染的样本进行E2和E6基因DNA水平的检测，用比值分析来判定病毒的整合情况。结果显示45例(61.64％)为游离状态，18例(24.66％)为混合状态，10例(13.70％)为整合状态。HPV整合事件与宫颈癌临床分期(x2=0.006，P＞0.05)和宫颈癌组织学类型(x2=0.623，P＞0.05)等临床资料之间没有相关性。T178G-A647G-T846C共突变也与病毒的存在状态不相关(x2=3.696，P＞0.05)。 3.分析E6基因的剪接变化发现，这些样本中E6的剪接异构体主要以E6*Ⅰ为主(P＜0.0001)，部分样本检测不到E6*Ⅰ和E6，且E6和E6*Ⅰ的含量是呈正相关的（r=0.6335，P＜0.001）。病毒的整合事件(F=0.0667，P＞0.05)和T178G-A647G-T846C共突变(P＞0.05)均不影响E6剪接变化。E6剪接变化与宫颈癌的临床分期没有相关性(F=0.6399，P＞0.05)。 4.E2、E6、E7三个基因的转录本在这些样本中的相对含量不同(F=18.38，P＜0.001):E6和E7的转录水平均大于E2的转录水平(P＜0.001，P＜0.001)，E6和E7的转录水平间无显著性差异(P＞0.05)。E2基因的转录水平在病毒游离状态高于混合状态(p＜0.01)，游离状态高于整合状态(P＜0.05); E6(p＜0.01)和E7基因(p＜0.001)的转录水平都是在病毒整合状态高于混合状态(P＜0.01，P＜0.001)和游离状态(P＜0.05，P＜0.05)。在宫颈癌不同的临床分期中，E2、E6和E7基因的转录水平均无显著性差异(P＞0.05)。T178G-A647G-T846C共突变不影响E2、E6、E7基因转录本的含量(P＞0.05)。 结论:在本研究涉及的HPV16感染的宫颈癌临床样本范围内，围绕HPV16型的E2、E6和E7三个癌症相关基因所进行的有关检测和分析中，虽然发现这些基因在某些方面存在差异或相关性，但是没有发现与宫颈癌临床分期相关的因素。

目录

摘要

前言

1 HPV病毒和宫颈癌

2 E6、E7基因序列与致癌性的关系

3 E6基因的选择性剪接及其产物

4 HPV病毒整合与宫颈癌病程

5 E2、E6、E7基因的转录

实验材料与方法

一 实验材料

二 实验方法

1 实验标本和临床资料的收集

2 宫颈癌标本DNA／RNA的提取和质量鉴定

3 构建重组质粒

4 宫颈癌样本中HPV的分型检测

5 宫颈癌样本中HPV16型的E6和E7基因DNA序列检测

6 HPV16型病毒基因组整合到宿主基因组的检测

7 把RNA逆转录成cDNA

8 E6基因剪接的检测

9 用cDNA检测E2、E6、E7的相对转录水平

10 数据处理和统计分析

结果与分析

1临床资料

2 宫颈癌标本DNA和RNA质量鉴定

3 重组质粒的构建

4 样本HPV分型结果

5 HPV16型E6、E7基因突变情况检测

6 HPV16型基因组整合到宿主基因组的检测

7 RNA逆转录结果

8 E6 mRNA剪接的检测

9 用相对定量法检测E2、E6、E7基因mRNA水平

讨论

小结

参考文献

附录

致谢

研究生简历

声明