中药材水煎液铬形态分析方法研究及异丹叶大黄素小鼠血药浓度研究

摘要

本论文研究共分为两部分内容，论文第一部分为中药材水煎液铬形态分析方法研究。中药材中的重金属污染引起世界各国的关注，重金属的存在不仅影响中药材产品的质量和安全性，而且成为中药材进入国际市场的一大障碍，因此，毒性重金属的含量控制对于保障中药材的质量极为重要。重金属铬在我国药典中没有检测项，同时重金属铬的不同价态所对应的毒性差异较大，为了保障中药材产品的安全以及正确评估重金属铬的毒性，建立中药材中重金属铬的形态分析方法具有十分重要的意义，从而评价药材中重金属铬的存在状况及污染程度。 首先采用本实验室已经建立的总铬分析方法对8种矿物类药材进行总铬含量测定，由于总铬与毒性存在不对应性，需进一步建立铬形态分析方法。论文建立了一种简单、快速的药材铬形态分析的前处理方法，前处理过程中将三氟乙酰丙酮与环己烷混合，再加入pH5.7的醋酸-醋酸钠缓冲溶液，三者的体积比为1∶2∶2，制得TFA缓冲溶液，采用TFA作为螯合剂与Cr(Ⅲ)70℃水浴中反应形成可挥发性螯合物CrⅢ(TFA)3，通过石墨炉升温程序将螯合物完全挥发，将Cr(Ⅲ)和Cr(Ⅵ)分离，采用1 mg/mL硝酸镁作为基体改进剂，测定Cr(Ⅵ)的含量。方法学验证结果表明:Cr(Ⅵ)在0 ng/mL～100 ng/mL范围内线性良好，检出限为0.63 ng/mL，定量限为2.1 ng/mL，五种矿物类中药材的加标回收率为96.8％～105.8％，适用于五种矿物药材中铬的形态分析。同时采用本实验室建立的总铬分析方法检测药材水煎液中总铬的含量，从而准确评价药材水煎液中总铬和Cr(Ⅵ)的含量。试验结果表明:8种矿物类中药材水煎液中Cr(Ⅵ)含量远小于EPA的RfD值所计算的每日可容忍的摄取量，矿物类中药材通过水煎进入水煎液中的有毒重金属六价铬含量很低，污染较小，所带来的健康风险很低。 论文第二部分为异丹叶大黄素在小鼠体内的血药浓度研究。本部分建立了异丹叶大黄素血药浓度的LC-MS/MS的分析方法，血浆样品的前处理方法为:等体积pH3.2盐酸溶液加入到血浆样品中混匀，用乙酸乙酯萃取，氮气吹干，用流动相将残渣复溶进样，以Shimpack ODS C18(2.3×75mm，3μm)为色谱柱，流动相为甲醇(A):0.1％甲酸(B)(65∶35，(V)/(V))，梯度洗脱，洗脱程序为0～0.3min，VB:65％;0.3～0.8min, VB:65％～95％;0.8～2.5min, VB:95％;2.5～2.6min, VB:95％～65％;2.6～6.5min，VB:65％;流速为0.2 ml/min，采用多重反应检测模式(MRM)负离子模式进行检测，定量离子对为m/z258.0/247.1（异丹叶大黄素）和271.1/151.0（内标:柚皮素）。试验结果显示:异丹叶大黄素血浆加标样品在5 ng/mL～20μg/mL范围内线性关系良好(r=0.9993)，低、中、高浓度的回收率为98.9％，99.7％和104.2％。将低、中、高三个给药剂量浓度与AUC(0-t)、AUC(0-∞)和Cmax进行多剂量药动学比例化线性关系分析，结果显示异丹叶大黄素灌胃剂量在40 mg/kg～160 mg/kg范围内，AUC(0-t)、AUC（0-∞）和Cmax与剂量呈线性关系，异丹叶大黄素在本次试验的剂量范围内具有线性药代动力学特征。异丹叶大黄素在小鼠体内的药代动力学研究结果显示:低、中、高三个剂量的异丹叶大黄素在小鼠体内的达峰时间(Tmax)分别为:0.103±0.053 h、0.125±0.102 h、0.139±0.101 h;达峰浓度(Cmax)分别为:8786.940±4233.021μg/L、13173.319±2480.959μg/L、16471.568±2445.476μg/L;消除半衰期(t1/2)分别为:1.253±0.154 h、1.886±0.741 h、1.619±0.630 h，表明异丹叶大黄素在小鼠体内迅速达峰，代谢较快，不利于长时间维持有效浓度。由于异丹叶大黄素具有多种良好药理活性，对其进行进一步结构修饰，研究合适的给药方式和剂型，使其可以维持相对较为稳定的有效治疗浓度，从而增加异丹叶大黄素成药性，本次试验对异丹叶大黄素的成药性具有指导意义。

目录

摘要

第一部分 中药材水煎液铬形态分析方法研究

第一章 引言——有毒重金属六价铬cr(VI)研究进展

1．重金属六价铬的毒性

2．总铬的测定分析方法

3．铬形态分析检测方法研究进展

4．铬形态分析方法建立的难点

第二章 铬形态分析方法建立及五种矿物药水煎液污染状况评价

1．仪器设备与实验材料

2．方法

3．测定结果

4．讨论

第二部分 异丹叶大黄素小鼠血药浓度研究

第一章 引言——异丹叶大黄素药理活性研究进展

1．抗氧化作用

2．抗病毒活性

3．抗炎活性

4．抗肿瘤活性

5．心血管系统

第二章 小鼠灌胃异丹叶大黄素的血浆药代动力学研究

1．仪器设备和实验材料

2．分析条件

3．小鼠血浆中异丹叶大黄素测定方法的建立

4．实验结果

5 讨论

第三部分 总结

英文缩略词

参考文献

致谢

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